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目的1、研究不同浓度的2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠实验性结肠炎的效果,根据大鼠存活情况、疾病活动指数(DAI)、大体形态损伤指数(CMDI)、组织学损伤指数(TDI)评分,选择最适的TNBS造模浓度及合适的药物干预时间。2、观察早期使用沙利度胺对TNBS诱导的大鼠实验性结肠炎的治疗作用,并与英夫利昔、5-氨基水杨酸进行疗效比较,初步探讨沙利度胺治疗克罗恩病的可能机制。方法1、SD大鼠24只,随机分为正常对照组(Ⅰ组,4只),TNBS 100mg/kg组(Ⅱ组,10只)和TNBS 150mg/kg组(Ⅲ组,10只),Ⅰ组予0.9ml生理盐水灌肠,Ⅱ组、Ⅲ组分别予100mg/kg、150mg/kg TNBS/无水乙醇混合溶液(V/V为2/1)灌肠诱导大鼠实验性结肠炎模型,Ⅰ组于造模后1、3、7、14天各处死1只大鼠,Ⅱ组、Ⅲ组分别于造模后1、3、7天各处死2只大鼠,造模后14天处死其余大鼠,留取标本,记录大鼠自然死亡情况,行DAI、CMDI、TDI评分,根据结果,确定最适的TNBS浓度,选择合适的药物干预的起始时间。2、SD大鼠50只,随机分为正常对照组、结肠炎组、沙利度胺组、英夫利昔组、5-氨基水杨酸组,每组10只。正常对照组予0.9ml生理盐水灌肠,其余4组根据预实验探索的TNBS最适浓度予TNBS(100mg/kg)/无水乙醇混合溶液(V/V为2/1)灌肠诱导大鼠实验性结肠炎模型。造模后24小时开始药物干预,正常对照组、结肠炎组予生理盐水4ml/kg灌胃,沙利度胺组予沙利度胺(200mg/kg)/生理盐水混合液4ml/kg灌胃,英夫利昔组予英夫利昔(5mg/kg)/生理盐水混合液10mg/ml腹腔注射,5-氨基水杨酸组予5-氨基水杨酸(100mg/kg)/生理盐水混合液4ml/kg灌胃,每天1次,连续14天后深度麻醉处死大鼠,留取标本。行DAI、CMDI、TDI评分,免疫组织化学方法检测结肠组织中的TNF-α、NF-κBp65的表达,ELISA法检测血清中TNF-α的含量。结果1、100mg/kg、150mg/kg TNBS/无水乙醇混合溶液(V/V为2/1)均可成功诱导大鼠实验性结肠炎模型。与TNBS 150mg/kg组相比,TNBS 100mg/kg组大鼠自然死亡数目较少,分别为1只与3只,症状、大体病理及组织病理严重程度较轻,DAI、CMDI、TDI评分亦较低,分别为3.00 VS 3.34,6.00 VS 7.50,5.50 VS 7.50(1天处死组);3.17 VS 3.67,7.50 VS 8.50,7.50 VS 8.50(3天处死组);2.67VS 3.17,6.50 VS 7.50,6.00 VS 7.00(7天处死组);2.44 VS 2.67,5.33 VS6.00,5.67 VS 7.00(14天处死组)。2、结肠炎组大鼠与正常对照组相比,DAI、CMDI、TDI评分分别为2.46±0.87 VS 0.07±0.14,5.38±1.19 VS 0.20±0.42,5.88±1.25 VS 0.10±0.32,P<0.05;沙利度胺、英夫利昔、5-氨基水杨酸组大鼠与结肠炎组相比,DAI、CMDI、TDI评分分别为0.83±0.72、0.67±0.78、1.22±0.78 VS 2.46±0.87,2.30±1.16、2.11±1.27、3.56±1.33 VS 5.38±1.19,2.70±0.95、2.44±0.88、3.89±1.05 VS5.88±1.25,P<0.05;从疗效上看,沙利度胺、英夫利昔组大鼠与5-氨基水杨酸组相比,DAI、CMDI、TDI评分分别为0.83±0.72、0.67±0.78 VS 1.22±0.78,P>0.05;2.30±1.16、2.11±1.27 VS 3.56±1.33,P<0.05;2.70±0.95、2.44±0.88 VS 3.89±1.05,P<0.05;沙利度胺组大鼠与英夫利昔组相比,DAI、CMDI、TDI评分分别为0.83±0.72 VS 0.67±0.78,2.30±1.16 VS 2.11±1.27,2.70±0.95 VS 2.44±0.88,P>0.05。提示沙利度胺、英夫利昔的疗效优于5-氨基水杨酸,而沙利度胺的疗效与英夫利昔相当。与正常对照组相比,结肠炎组大鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05),[9.75±1.28 VS 0.80±0.92,8.63±1.41 VS0.50±0.71,P<0.05];而沙利度胺、英夫利昔、5-氨基水杨酸组大鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达与结肠炎组相比显著降低(P<0.05),[3.80±1.23、3.22±1.09、5.22±1.39 VS 9.75±1.28,2.60±1.27、2.33±1.23、4.22±1.64VS 8.63±1.41,P<0.05];与5-氨基水杨酸组相比,沙利度胺、英夫利昔组大鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达较低,差异具有统计学意义(P<0.05),[3.80±1.23、3.22±1.09 VS 5.22±1.39,2.60±1.27、2.33±1.23 VS 4.22±1.64 P<0.05];与英夫利昔组相比,沙利度胺组大鼠结肠组织TNF-α、NF-κBp65表达较高,但差异无统计学意义(P>0.05)[3.80±1.23 VS 3.22±1.09;2.60±1.27VS 2.33±1.23,P>0.05]。其中结肠炎组大鼠结肠NF-κBp65的表达以胞核为主,正常对照组、沙利度胺组、英夫利昔组及5-氨基水杨酸组大鼠结肠NF-κBp65的表达以胞质为主。与正常对照组大鼠相比,结肠炎组大鼠血清TNF-α表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),[291.65±42.71 VS 6.08±0.47,P<0.05];沙利度胺、英夫利昔、5-氨基水杨酸大鼠血清TNF-α表达与结肠炎组相比明显降低,具有统计学意义(P<0.05),[34.56±3.07、22.19±2.78、61.60±5.10 VS 291.65±42.71,P<0.05];与5-氨基水杨酸组相比,沙利度胺、英夫利昔组大鼠血清TNF-α表达明显降低(P<0.05),[34.56±3.07、22.19±2.78 VS 61.60±5.10,P<0.05];与英夫利昔组相比,沙利度胺组大鼠血清TNF-α表达较高,但差异无统计学意义(P>0.05)[34.56±3.07 VS 22.19±2.78,P>0.05]。结肠组织NF-κBp65与结肠组织TNF-α的表达呈正相关,相关系数为r=0.876,P<0.05;结肠组织NF-κBp65的表达与血清TNF-α的水平呈正相关,相关系数r=0.848,P<0.05。结论1、100mg/kg、150mg/kg TNBS/乙醇混合溶液(V/V为2/1)均能诱导出与人类CD相似的大鼠实验性结肠炎模型,但根据大鼠存活情况、DAI、CMDI、TDI评分,100mg/kg为较合适的造模浓度,符合实验要求,并且DAI、CMDI、TDI评分的高峰期都在第三天,所以造模后1天是较为合适的药物干预的起始时间。2、沙利度胺对TNBS/乙醇诱导的结肠炎模型大鼠具有治疗作用,其机制可能是通过阻断NF-κB通路,降低TNF-α的水平,从而发挥对CD的治疗作用。