目的:快速增殖和进展是多形性胶质细胞瘤(Glioblastoma Multiforme;GBM)最重要的特征之一。在国际卫生组织分类法中,GBM属于Ⅳ级胶质瘤,其预后生存时间不超过14个月。因此,恶性胶质瘤被认为是无法治愈的疾病,必须寻找一种全新的治疗手段。 恶性胶质瘤细胞的增殖与一种DNA聚合酶——端粒酶的异常激活紧密相关。新近研究显示人端粒酶的蛋白成份人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)在恶性胶质瘤细胞(malignant gliomas;MG)中不仅表达,且表达水平异常增高。这一端粒酶蛋白亚单位可能是抑制侵袭性肿瘤如MG增殖过程的关键。一个特殊原因就在于hTERT是端粒形成的限速成份,因此已经成为一个极具前途的干预靶点。另一个关键原因是hTERT是端粒酶两种必需组份之一。 本研究中我们向hTERT mRNA富集的MG细胞——TJ905细胞中导入一个hTERT的互补片段反义抑制其在恶性胶质瘤细胞中的转录后表达。我们希望能通过这一方法起到抑制端粒酶形成的作用;并通过降低端粒酶的活性,最终抑制恶性胶质瘤细胞的增殖。 方法:为了证实该反义封闭技术的有效性,我们选用了四种方法检测细胞增殖情况。首先,用Lipofectamine 2000将表达正义和反义hTERT的表达载体及对照载体pCDNA3.0转染至TJ905 GBM细胞系(该细胞系来源于天津市神经病学研究所神经肿瘤研究室),并用G418进行筛选。对转染细胞进行足量传代后,用克隆形成率和MTT染色技术评价被转染细胞的生长情况,以揭示与对照细胞系相比转染胶质瘤细胞的生长潜能。在MTT实验中,我们通过免疫组织化学染色和流式细胞术进一步检测了细胞增殖的动力学特点。通过Ki-67(MIB-1)免疫组织化学染色可观察细胞的增殖活性。通过流式细胞术可检测不同实验组细胞所处的细胞周期。 结果:G418筛选14天后对转染正义和反义表达载体及pCDNA3.0对照载体的TJ905 GBM细胞进行检测。我们利用8天的时间对对照组、正义hTERT组和反义