基于精子发生微环境探讨加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张模型大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:y4o1999
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目的:基于精子发生微环境探讨加味大黄蟅虫颗粒对精索静脉曲张(varicocele,VC)模型大鼠生精细胞凋亡的调控,评价加味大黄蟅虫颗粒对VC模型大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法:选取40只清洁级青春期雄性SD大鼠,按随机数字表法分成假手术组、模型组、迈之灵组及加味大黄蟅虫颗粒组,每组10只。参照Turner部分左肾静脉缩窄术建立VC大鼠模型。造模完成后,假手术组及模型对照组大鼠均给予生理盐水,迈之灵组给予迈之灵片54mg/kg,溶于20m L生理盐水中,加味大黄蟅虫颗粒组予以含生药10.8g/kg加味大黄蟅虫颗粒水冲剂,以上各组灌胃体积均为1m L/100g,1次/d,持续8周。给药8周后,将各组大鼠进行称重并断颈处死,开腹取出双侧睾丸及附睾组织。运用精子计数板和彩色精子质量分析系统检测大鼠附睾精子质量,HE染色观察各组大鼠睾丸局部显微结构的病理变化,透射电镜观察各组大鼠睾丸局部超微结构的病理变化,流式细胞仪检测各组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况,荧光定量PCR检测各组大鼠睾丸组织中凋亡基因Fas、Fas L、Caspase-3、Caspase-9的表达含量。结果:1.一般情况分析:造模完成后,各组大鼠均出现不同程度的精神萎靡、活动减弱、进食及饮水减少,随后模型组出现不同程度的毛发干枯、光泽晦暗等症状,部分大鼠甚至出现毛发脱落的情况,但以上情况至术后1周呈逐渐好转趋势;各组大鼠的体质量在实验阶段基本呈增长趋势,但组内比较差异均无统计学意义(P>0.05)。2.精液质量结果显示:相较于假手术组,模型组精子密度、精子活3.率明显降低,左精索静脉直径明显增加(P<0.01);相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组精子密度、精子活率均明显改善,左精索静脉直径均显著降低(P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组精子密度、精子活率均有所改善(P<0.05),而左精索静脉直径未见明显差异(P>0.05)。4.显微超微结构结果分析:假手术组生精细胞完整且层次清晰,浆内多见适量的细胞器、丰富的线粒体;模型组多见未成熟的生精细胞,出现空泡变性;迈之灵组管腔内见多数生精细胞,内质网及线粒体排列整齐;加味大黄蟅虫颗粒组管腔内见大量成熟生精细胞,浆内可见大量大量的线粒体、溶酶体、高尔基体及精子。5.流式细胞仪检测结果显示:相较于假手术组,模型组生精细胞凋亡率明显升高(P<0.01);相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组生精细胞凋亡率均有所降低(P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组生精细胞凋亡率均有所降低(P<0.05)。6.荧光定量PCR检测结果显示:(1)Fas:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Fas表达明显升高(P<0.01);相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Fas明显下降(P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能有效降低Fas表达(P<0.05);(2)Fas L:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Fas L表达明显升高(P<0.01);相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Fas L有效降低(分别为P<0.05,P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能有效降低Fas L表达(P<0.05);(3)Caspase-3:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Caspase-3表达明显升高(P<0.01);相较于模型组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-3有效下降(分别为P<0.05,P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组能明显降低Caspase-3表达(P<0.05);(4)Caspase-9:相较于假手术组,模型组睾丸生精细胞凋亡基因Caspase-9表达明显升高(P<0.01);相较于模型7.组,迈之灵组、加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-9含量明显下降(P<0.01);相较于迈之灵组,加味大黄蟅虫颗粒组Caspase-9表达下调未见明显差异(P>0.05)。结论:1.本实验研究参照Turner经典造模法成功建立VC大鼠模型,且研究发现模型大鼠睾丸病理组织严重受损,生精细胞凋亡明显,凋亡基因Fas、Fas L、Caspase-3、Caspase-9表达显著上升,表明生精细胞过度凋亡可能是VC性不育症的主要细胞分子机制。2.加味大黄蟅虫颗粒可显著改善VC模型大鼠精液质量,并发挥对大鼠睾丸组织损伤的保护作用,从而改善睾丸局部微环境,为精子的发育成熟提供有利条件,这可能与其有效调控生精细胞凋亡有关。
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