论文部分内容阅读
目的：研究丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 (Mitogen-activated protein kinase phosphatase-1, MKP-1)在不同月龄段APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)模型小鼠及其同窝野生型小鼠脑内的分布及表达差异,以探讨MKP-1在AD病理发生发展过程中所起的作用。方法：选择3月、8月和12月龄的APP/PS1双转基因小鼠及其同月龄段的野生型小鼠作对比,运用免疫组化观察AD模型小鼠及其同窝野生型小鼠脑内MKP-1的分布及表达；免疫荧光检测MKP-1在不同年龄段AD模型小鼠脑内的变化；Western Blot检测MKP-1、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)、p-ERK、c-Jun氨基端激酶(c-JUN N-terminal kinases,JNK)、p-JNK、P38激酶同工酶(P38kinases,p38)及p-p38的变化；Real Time-PCR检测MKP-1和BDNF的mRNA的变化,激光共聚焦检测MKP-1和4G8、p-ERK和4G8、p-JNK和4G8、p-p38和4G8共表达情况。结果：1.形态学结果：1)MKP-1在APP/PS1双转基因小鼠脑内广泛分布,包括大脑皮质、海马、纹状体、嗅球和小脑等；MKP-1免疫阳性细胞在APP/PS1双转基因小鼠脑内的数量明显低于同月龄的正常对照组(P<0.05),且随着APP/PS1双转基因小鼠月龄的增加,MKP-1免疫阳性细胞的数量逐渐降低；实验还发现,MKP-1免疫阳性物形成类似老年斑的斑块；免疫荧光双标结果显示,与4G8阳性斑块(此即老年斑)相比,MKP-1阳性斑块的数量远远低于4G8阳性斑块的数量,但是MKP-1只能表达出部分老年斑,随着APP/PS1双转基因小鼠月龄的增加,表达的老年斑数目也逐渐增加。2.Western blot结果：随着APP/PS1双转基因小鼠月龄的增加,MKP-1(P<0.05)和BDNF(P<0.05)的蛋白表达明显减弱,JNK(P>0.05)、 ERK(P>0.05)和P38(P>0.05)的变化无统计学差异而p-JNK(P<0.05)、 p-ERK (P<0.05)和p-P38(P<0.05)则蛋白表达明显上调。结论：MKP-1在APP/PS1双转基因不同年龄段小鼠脑内及与其同窝野生型小鼠脑内MKP-1的表达存在差异,而且可以表达部分老年斑可能和Ap的产生和AD的发病机制相关。