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本实验根据实验室转录组数据,首次运用Race-PCR及巢式PCR技术从淡水珍珠贝类池蝶蚌中获得一个剂量补偿相关基因msl-1(male-specific lethal-1)基因的c DNA全长序列,获得结果如下:1、池蝶蚌msl-1的c DNA长度是3097bp,其中3’非编码区含1586bp,5’非编码区638bp,拥有一个29bp的poly A尾,并且含有多聚腺苷信号信号ATTAAA;它的开放阅读框为873bp,编码290个氨基酸;无信号肽。生物学软件预测其分子量约为33694.12Da,理论等电点为8.27;对其编码的蛋白结构域分析可知,在MSL-1的N端第166到297个氨基酸区域具有一个完整PEHE结构域,该结构域为MSL-1的特异性结构;通过二级结构预测可知,在MSL-1二级结构中,无规则卷曲和环形结构最多,其次为α螺旋结构(H),β折叠结构(E)最少;通过N-J法绘制的系统进化树表明,池蝶蚌msl-1基因序列总体与其它动物的msl-1亲缘性较低,其中与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)msl-1的同源性最高为55%,其与太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)和莲花青螺(Lottia gigantea)共一分支。2、Q-PCR结果发现msl-1基因在取材的全部池蝶蚌组织中表达,存在明显的组织差异性,并且在雄性性腺中表达相对最高,其次是在肾脏、肠中,在心脏中表达量最低;在不同年龄池蝶蚌性腺中的m RNA表达情况:雌性当中,msl-1基因在1龄中的表达量较少,2、3龄时略有上升之后回落,但是在4龄时出现表达量显著上升现象,且是1龄的6.48倍,在5龄时又有所回落,甚至略低于一龄时的表达量;在雄性中,msl-1基因在1、2龄的表达量较高且呈上升趋势,3~4龄的表达量则下降明显;至5龄时,表达量提高明显,并且远高于1、2龄的表达水平;此外,msl-1在雄性性腺中的表达量普遍高于同时期在雌性性腺中的表达量,但在4龄时雌性中的表达量却略高于雄性中的表达量。3、通过连接原核表达载体,构建p EASY-msl-1重组载体,构建成功的重组载体转入E.coli(DE3),使用半乳糖苷酶底物类似物诱导表达MSL-1融合蛋白。MSL-1重组蛋白主要在上清中存在,根据Ni2+螯和层析法原理纯化出单一的目的蛋白。纯化后的MSL-1重组蛋白免疫新西兰兔得到多克隆抗体,经过检测抗体效价在512000以上,同时Western blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有很好的生物学特异性;利用多克隆抗体对池蝶蚌性腺组织冰冻切片进行免疫荧光定位,发现MSL-1蛋白主要在核膜上表达。