论文部分内容阅读
自身免疫性内耳病(Autoimmune inner ear disease，AIED)是目前少数几种经恰当治疗可获得较好疗效的内耳病之一。因为尚无满意的检查方法以确定内耳自身免疫的进程，而且人的内耳疾病不能经活检诊断，故建立该病的动物模型对于揭示其发病机理有重要的实际意义。现有的AIED动物模型还有很多缺点。Fas-FasL信号系统通过介导凋亡在各种生物进程中起重要的作用，包括发育及组织稳态。Bcl-2可通过多种途径对凋亡进行有效的抑制。在器官特异性自身免疫病的组织破坏阶段，Fas-FasL的相互作用可能是共同的致病机制。 目的 1．建立一种自身免疫性内耳病的动物模型，应具有可重复性高，适于进行深入的免疫学分析的优点。以有助于进一步阐明AIED的发病机制、病理特点及内耳免疫反应进程。 2．了解凋亡与AIED发病机制的关系，明确凋亡及其相关分子Fas、FasL和Bcl-2在AIED小鼠的耳蜗中的表达，及其在AIED的产生和发展中的作用。 方法 1．提取豚鼠内耳膜迷路组织为内耳抗原(Inner ear antigens，IEAg)，皮下注射等量IEAg与完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant，CFA)的乳剂，加用百日咳减毒活菌免疫近交系动物，C57BL／6小鼠，仅此一次，不再进行加强免疫。 2．ABR法检测反应阈的改变，ELISA法检测血清中抗IEAg抗体水平，光镜下对H.E.染色的切片进行内耳形态学改变的评价，免疫组化法鉴定内耳中浸润的炎性细胞。 3．提取小鼠耳蜗组织RNA，免疫前后耳蜗中Fas、FasL和Bcl-2 mRNA的变化由RT-PCR法半定量检测，以β-actin mRNA为内对照。 4．TUNEL法检测耳蜗组织内凋亡的表达，耳蜗中Fas，FasL和Bcl-2分子的表达变化由免疫组化法检测。 5．实验数据以均值±标准差表示，行方差分析或t检验等统计学处理。