大鼠嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究

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大鼠嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的实验研究 第一部分:新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的体外培养 目的 探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的体外培养和纯化方法,并观察其形态学及免疫细胞化学特性,为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs,比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法纯化效果,根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度,同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三极细胞,其突起细长。未经纯化则成纤维细胞生长迅速而占据优势,而三种纯化方法中均能使接种14天后OECs纯度均在75%以上。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制纯化效率略高于差速贴壁法。结论 新生大鼠嗅球OECs的原代培养中细胞纯化是必要的;在脊髓损伤再生研究中,较之p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制,差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。 第二部分:嗅鞘细胞移植促进大鼠脊髓损伤后功能恢复 目的 探讨嗅鞘细胞(OECs)移植对脊髓损伤(SCI)的功能恢复和促进神经再生作用。方法 7只成年SD大鼠T9脊髓半横断损伤后,植入体外培养纯化的OECs于脊髓损伤处,另7只对照组只植入DMEM培养基。术后10周内采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况。术后10周末通过辣根过化物酶(HRP)逆行示踪技术评价OECs对神经元存活和纤维再生的影响。结果 OECs移植组大鼠损伤侧后肢运动功能的恢复情况和损伤侧红核HRP标记神经元的数目均优于未移植对照组。结论 OECs移植能促进成年大鼠SCI后宿主损伤脊髓的功能恢复和轴突再生。
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