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豆粕是使用最广泛的植物性蛋白质饲料之一,但豆粕中抗营养因子的存在严重制约了豆粕的应用,如何去除豆粕中的抗营养因子已成为饲料行业的重要问题。近年大量研究表明微生物发酵法能有效去除抗营养因子。微生物发酵法可以将大分子的蛋白质分解为小分子的多肽和氨基酸,不仅除去了抗营养因子同时还提高了豆粕的营养利用率。乳酸菌是使用最早、分布最为广泛的益生菌。本研究旨从健康的仔猪肠道中筛选出具有高产蛋白酶、高耐胆盐特性的乳酸菌,对该菌进行鉴定、生物学特性研究,进一步优化其培养基成分及冻干保护剂的筛选,并用筛选出的菌株结合本实验室保藏的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌进行豆粕发酵,初步研究其作为发酵剂发酵豆粕及对豆粕品质的影响,为去除抗营养因子提高豆粕品质的发酵剂研究提供基础数据,研究的主要内容和结论如下:(1)通过初筛及高产蛋白酶的复筛,获得一目的菌株。该菌为革兰氏阳性菌,菌落凸起呈圆形,直径1.0~1.5 mm,白色,边缘整齐,湿润;显微镜下菌株为单个球形,直径约0.8μm,无荚膜,无芽孢。经生理生化及16S rDNA鉴定,该菌株为屎肠球菌,并将其命名为WLEF-01。(2)WLEF-01的生物学特性测定的结果显示:WLEF-01生长迅速,在0.5 h进入对数期,5 h左右达到稳定期,稳定期长。WLEF-01有很强的产酸能力,在对数期培养基的pH迅速下降,最终达到4.5左右。WLEF-01具有一定的耐酸能力,pH在4~6.8时存活率都维持在50%以上。该菌耐胆盐的能力突出,在胆盐浓度0.3%条件下作用2 h活菌率达到90%,在胆盐浓度1%的条件下作用2 h活菌率也有83%。WLEF-01对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有一定抑制作用,并对庆大霉素、复方新诺明、壮观霉素、先锋霉素、苯唑西林、卡那霉素、林可霉素有耐药性。(3)通过对WLEF-01的培养基的优化,最佳培养基为:1%乳糖、4%酵母粉、0.25%乙酸钠、15%番茄汁、pH为6.5。最佳条件下OD600值达到1.617。最佳的冷冻干燥的保护剂成分为:10%脱脂奶粉、5%海藻糖、5%乳糖、7.5%麦芽糊精、2.5%蛋白胨,WLEF-01的存活率达到41.85%。(4)将WLEF-01和本实验室保藏的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌分别进行单一菌株发酵豆粕和复合菌株发酵豆粕。试验结果显示:单一菌株发酵豆粕对蛋白质分解的效果WLEF-01>植物乳杆菌>枯草芽孢杆菌。复合菌株发酵对去除抗营养因子的效果优于单一菌株发酵,通过复合菌株正交试验结果显示:接种量为枯草芽孢杆菌5%、植物乳杆菌1%、WLEF-01 5%效果最佳;蛋白质分解最彻底,没有明显的蛋白条带;发酵后豆粕的pH最低达到4.8;大肠杆菌的抑菌圈直径达到13.75 mm;真空冷冻干燥后WLEF-01菌数高达3.92×1010 cfu/g。