论文部分内容阅读
目的:探究FGF21在大鼠酒精性肝纤维化形成与消退中的作用。方法:选取50只6-8周龄（180-200g）清洁级健康雄性SD大鼠,适应性喂养一周后,随机分为对照组（10只）和实验组（40只）。实验组给予普通饲料喂养,并予10%酒精灌胃联合40%CCl4花生油混合液腹腔注射制备肝纤维化大鼠模型,对照组给予普通饲料喂养,并予0.9%生理盐水进行灌胃和腹腔注射。在造模4周后,随机处死对照组和实验组大鼠各4只进行造模情况评估。6周后随机处死实验组大鼠4只,确定肝纤维化模型成功建立后,将实验组动物进行分组干预。将余下实验组大鼠随机分为自然恢复组、秋水仙碱组、模型组。前期对照组继续予普通饲料喂养并给予0.9%生理盐水灌胃2周;自然恢复组予普通饲料喂养并给予0.9%生理盐水灌胃2周;秋水仙碱组予普通饲养并给予秋水仙碱药物灌胃干预2周。模型组停止酒精灌胃,给予50%的CCl4花生油溶液腹腔注射维持肝纤维化2周。在第8周后处死所有大鼠进行试验。实验方法:1.戊巴比妥钠麻醉后腹主动脉取血,低速离心（3000r/min,15min）取血清,用生化分析仪检测以下指标血清生化水平:空腹血糖（FPG）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）、总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LD-LC）、糖化血清蛋白（GSP）;采用胰岛素放免试剂盒测定空腹胰岛素（FINS）水平。2.留取肝脏组织,一部分肝脏组织,冻存于-80℃冰箱,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测白介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、I型胶原蛋白（COL I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和FGF21水平,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测肝脏FGF21 m RNA的表达水平。另一部分肝脏组织经4%多聚甲醛溶液固定,石蜡包埋,用于HE染色和Masson染色。结果:1、用酒精联合CCl4诱导SD大鼠,在6w时即可见肝脏呈典型的酒精性肝纤维化病理表现;随着造模时间延长,大鼠肝脏中炎症因子和肝纤指标（α-SAM、COLI、TGF-β1、TNF-α及IL-6）含量显著升高,血液中肝功能指标（ALT及AST）显著升高,肝脏和血液中的各项指标变化与病理表现一致。2、在酒精性肝纤维化形成过程中,肝脏中FGF21变化趋势为先升高,后降低,在酒精性肝纤维化后期出现分泌不足。在酒精性肝纤维化形成过程中,肝脏中FGF21含量与α-SAM、COLI、TGF-β1、TNF-α、IL-6含量呈负相关（r分别为-0.884、-0.905、-0.905、-0.816、-0.856,P<0.01）。3、秋水仙碱可显著改善酒精性肝纤维化大鼠肝脏病理改变,显著降低肝脏中α-SAM、COLI、TGF-β1、TNF-α及IL-6的含量,抑制肝脏炎症反应和胶原纤维增生;降低血液中ALT、AST、TBIL、DBIL含量,改善肝功能;降低血液中INS含量,改善胰岛素抵抗。4、在秋水仙碱干预酒精性肝纤维化大鼠过程中,与模型组相比,秋水仙碱组FGF21含量显著升高[（5.71±2.16）vs（21.49±10.2）pg/ml,（P<0.05）];同时,FGF21m RNA表达水平也显著升高[（0.92±0.11）vs（2.33±0.42）,（P<0.05）]。结论:1、酒精联合CCl4可成功诱导SD大鼠酒精性肝纤维化模型。2、在酒精性肝纤维化形成过程中,肝脏FGF21起抵抗炎症和HSC活化作用。酒精性肝纤维化后期肝脏中FGF21分泌不足,可能是导致肝纤维化进展的原因之一。3、秋水仙碱可成功逆转大鼠酒精性肝纤维化,提高肝脏FGF21含量及表达水平。提高体内FGF21含量可能是酒精性肝纤维化逆转的促进因素。