玉米皮免疫活性多糖的关键技术研究

来源 :吉林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:darksmile11
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本论文研究内容隶属于长春市科技局计划项目(13NK03),以玉米皮为原料,重点开展了玉米皮多糖(CBPS)提取技术的优化、玉米皮多糖(CBPS)纯化及结构初探、玉米皮多糖(CBPS)品质控制、体外免疫活性的研究等四个方面的内容,具体研究内容如下:(1)玉米皮多糖提取的工艺研究中,借助单因素、正交、响应面等实验设计方法,以多糖提取率为衡量指标,对比分析了四种方法对玉米皮多糖提取的影响。热水浸提法影响实验结果的因素重要性为:B(温度)>C(时间)>A(料液比),最佳提取条件为:时间3.5 h,温度70℃,料液比1:35。纤维素酶解构建回归模型为:Y=13.99-2.32X1-0.43X2+0.15X3-0.03X1X2+0.41X1X3-0.14X2X3-5.01X12-1.63X22-0.38X32,R2=0.9979,最佳的酶解条件为:酶解温度58.9℃,酶解pH 4.93,加酶量1.55%。电子束辐照技术辐照剂量为108.7 k Gy时多糖的提取率最高。高压脉冲电场辅助提取构建回归模型为:Y=15.54+0.37 X1+0.074 X2+0.46X3+0.56 X1X2+0.063 X1X3+0.17 X2X3-0.77 X12-0.84 X22-0.84 X32,R2=0.9853,最佳处理条件为:电场强度25 k V/cm,电场频率2080 Hz,液固比42:1。在此研究基础上,利用场发射扫描电子显微镜,对玉米皮超微粉及辐照后的物料进行电镜扫描,相对于未经过辐照处理的物料,经过辐照处理后的物料表面破碎程度大,更加粗糙,呈现出鳞片状结构,辐照剂量增加物料表面的破碎程度进一步变大。(2)玉米皮多糖的分离纯化及结构初探,进行脱色、除蛋白纯化处理以及结构初探,结果显示,水提法多糖纯化参数为吸附时间1.5 h,40℃,上柱液pH6.0,上柱液质量浓度3 mg/m L,其数均分子量为84589 Da;酶提法多糖纯化参数为吸附时间2.0 h,吸附温度40℃,上柱液pH 6.0,上柱液质量浓度4 mg/m L,其数均分子量为92968 Da;电子束辐照辅助酶法提取多糖纯化参数为吸附时间2.0 h,吸附温度45℃,上柱液pH 6.0,上柱液质量浓度3 mg/m L,其数均分子量分别为103462 Da,173564 Da;高压脉冲电场辅助酶法提取多糖纯化参数为吸附时间1.5 h,吸附温度45℃,上柱液pH 6.0,上柱液质量浓度4 mg/m L,其数均分子量分别为135637 Da,173564 Da。四种方法提取的多糖都有CH3、CH2、CH等的C-H伸缩振动,C=O伸缩振动,以及C-H的弯曲振动,同时还具有糖环结构,四种方法提取出的多糖都具有糖类物质所具有的特征吸收峰。(3)多糖的品质控制中,借助LF-NMR技术,对多糖中水分进行测定,多糖中含有三种不同状态的水组分,结合水,固定化水,自由水。跟踪测定48 h,多糖中结合水的变化明显,同时固定化水和自由水的含量降低。4℃条件下多糖中水分的含量呈现出动态变化,各水组分并无明显改变。25℃条件下,多糖吸水明显,水分含量增加,多糖的单位质量峰面积增大,表明多糖中各水分的变化是由于多糖粉从外部吸收水分导致的。4℃条件下多糖水分不成像,总水分含量保持平衡,从外界吸收的水分较少,更适合多糖的储存。(4)体外免疫活性的研究借助细胞生物学方法,利用Griess法对NO的释放量进行检测,建立标准曲线:Y=0.0143X+0.0671,R2=0.9957,线性关系良好。随着多糖浓度的增加NO的释放量增大,当多糖浓度为800μg/m L时NO释放量达到最大47.93±1.76μM,且不同方法提取出的多糖差异并不显著。利用ELISA法对TNF-α的分泌量进行检测,构建出的二元二次标准曲线模型为:Y=0.2662-10-6X2+0.003X,R2=0.9988,拟合关系较好。TNF-α的浓度,随着多糖浓度的增加而增大,当多糖浓度达到为800μg/m L时TNF-α的浓度达到最佳725.79±4.21 pg/m L,且不同方法提取出的多糖差异并不显著。
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