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背景甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%。近年来,随着检查手段的不断更新以及患者健康意识的不断增强,甲状腺癌患者的数量也在不断的增多。甲状腺癌的常见病理类型主要分为四类:乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma,PTC)、滤泡状癌(Follicular thyroid carcinoma,FTC)、髓样癌(Medullary thyroid carcinoma,MTC)及未分化癌(Anaplastic thyroid carcinoma,ATC)。其中甲状腺乳头状癌和甲状腺滤泡状癌合称为分化型甲状腺癌(differentiated thyroid cancer,DTC)约占95%左右,甲状腺髓样癌约占3%左右,甲状腺未分化癌不足1%。与分化型甲状腺癌相比,髓样癌是具有较强的侵袭性,大约有55%的患者在确诊甲状腺髓样癌的同时即伴有淋巴结转移及腺外侵犯,而这部分患者总体生存率为5年左右,是甲状腺癌患者死亡的主要原因之一。目前,甲状腺髓样癌的术前诊断主要依靠彩超、细针穿刺组织学活检及降钙素等,针对甲状腺髓样癌的治疗,首选依然是手术治疗,一般选取甲状腺全切术和区域淋巴结清扫术。具体的手术范围一般是根据术前检查及家族史初步制定。对于彩超提示存在可疑淋巴结转移,且术前血清降钙素大于200pg/mL的病例可选择甲状腺全切术+患侧颈部淋巴结清扫术+对侧颈部淋巴结预防性清扫术。但是对于术前彩超未提示淋巴结转移的病例,具体清扫范围,仍然存在争议。另外,部分经过手术治疗的患者术后会出现复发,甚至多次复发,使患者生活质量下降及预后变差。对于一些已经出现远处转移、多次复发或难治性甲状腺髓样癌患者,目前仍无明显有效的治疗手段。miRNA,作为癌症分子生物学领域的研究热点,已被证实参与多种病理生理学过程。大量文献表明,miRNA可以通过不同的途径调节靶基因的表达从而影响疾病的发生发展,甚至一些miRNA被证实可以作为诊断标志物辅助诊断,还可以作为药物靶点干预癌症的治疗并且改善疾病预后。同样,在甲状腺癌症也有大量失调的miRNA被发现。据文献报道,hsa-miRNA-30a在包括头颈部鳞癌、肝癌及乳腺癌等多种癌症的形成和发展中发挥调控作用。但是在甲状腺髓样癌中的表达情况尚未见文献报道。目前,基因组学和转录组学的研究逐渐深入,大量的芯片测序结果被储存于不同的数据库中。本文使用公共数据库中的芯片数据预测了甲状腺髓样癌细胞中差异表达的miRNA,然后运用RT-PCR对临床收集的甲状腺癌样本进行检测,得到目标miRNA的表达情况,并分析其与甲状腺髓样癌的临床病理特征关系。研究目的1.研究hsa-miR-30a在甲状腺髓样癌中的表达情况2.探讨hsa-miR-30a表达失调与甲状腺髓样癌各临床病理特征的相关性3.探讨hsa-miR-30a表达失调对甲状腺髓样癌有无淋巴结转移的诊断价值材料和方法1.通过对GEO数据库数据进行检索得到编号为GSE97070、GSE72728等两个数据集的miRNA表达谱数据及相应的临床信息,并使用limma程序包对数据进行处理,分析GSE97070中甲状腺髓样癌组织与癌旁正常组织中miRNA的差异表达情况。2.随机选取40例甲状腺髓样癌患者,收集甲状腺癌组织及癌旁正常甲状腺组织,运用qRT-PCR的方法检测样本中的目标miRNA。并统计该40例患者的临床信息。首先验证目标miRNA在甲状腺癌组织与癌旁正常组织中是否差异表达,然后分析目标miRNA与甲状腺髓样癌临床病理特征之间的关系,并同时分析GSE72728中目标miRNA与甲状腺髓样癌临床病理特征之间的关系,两个结果进行相互验证。3.预测miRNA靶基因,推测miRNA在甲状腺髓样癌形成和发展中的作用机制,为以后的研究提供方向。4.使用R x64 3.5.2软件运行limma软件包进行差异miRNA的筛选,筛选条件为|logFold Change(FC)|>1,adj.P<0.01,并做可视化火山图。运用SPSS19.0软件及GraphPad Prism 8软件进行miRNA与临床特征相关性的研究,根据分布类型选择t检验,若p<0.05则说明具有显著关联。研究结果hsa-miRNA-30a在甲状腺髓样癌中表达较正常样本低,与甲状腺髓样癌的肿瘤大小、有无淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征显著负相关,而与患者年龄、性别、甲状腺癌分型、是否存在腺外侵犯、是否多灶等临床病理特征无明显关联;has-miRNA-30a表达失调对于术前诊断甲状腺髓样癌是否伴有淋巴结转移具有良好的诊断价值。结论1.hsa-miRNA-30a在甲状腺髓样癌中表达较正常样本低,可以抑制肿瘤的发展;2.hsa-miRNA-30a低表达与甲状腺髓样癌的肿瘤大小、有无淋巴结转移、TNM分期等临床病理特征显著相关,而与患者年龄、性别、甲状腺癌分型、是否存在腺外侵犯、是否多灶等临床病理特征无明显关联;3.hsa-miRNA-30a表达失调对于术前诊断甲状腺髓样癌是否伴有淋巴结转移具有良好的诊断价值。