异孢镰孢YZ-03的产毒条件与毒素的生物活性测定

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YZ-03菌株是为害空心莲子草病原菌异孢镰孢的一个菌株,本研究采用生物测定的方法,研究不同培养基质、不同的培养时间和不同的培养基初始pH值等条件对YZ-03菌株产生毒素的影响。结果表明,YZ-03液体培养的最佳产毒条件是用初始pH6.0~7.0的PD培养液,在25℃、120rpm的振荡培养箱中培养30d;而适合YZ-03产毒的最佳固体培养基为菜籽饼培养基、麦粒培养基。用甲醇、石油醚、乙酸乙酯和去离子水提取YZ-03菌株固体培养物中的粗毒素,提取液经浓缩后获得粗毒素,并进行生物活性测定,结果表明,甲醇提取的粗毒素10mg/ml处理后,空心莲子草的病情指数最高,达91.42%,而石油醚提取物处理的病情指数最低,只有29.52%。采用种子萌发抑制试验法测定了粗毒素对小麦、大麦、玉米、水稻、绿豆、萝卜、稗草和醴肠胚根和胚芽的抑制,结果表明,10mg/ml粗毒素(甲醇提取)处理,醴肠、稗草、萝卜、玉米胚根生长抑制率分别达85.62%、78.51%、81.40%和82.18%,幼芽生长抑制率分别达69.45%、49.52%、30.42%和45.74%。采用叶碟法测定粗毒素对32种植物的致病性,结果表明,粗毒素对小藜和玉米叶片的致病性最强,5mg/ml粗毒素处理,小藜和玉米敏感性等级达到5级,其次是空心莲子草、泽漆和大麦,10mg/ml粗毒素处理,敏感性等级达到5级。用不同浓度的异孢镰孢YZ-03菌株粗毒素处理3~4叶期空心莲子草幼苗,分别测定了叶片组织细胞膜透性、叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)产生速率,以及过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性。结果表明,粗毒素处理后,细胞膜透性和MDA含量随着处理时间的延长,细胞膜透性增加,MDA含量在空心莲子草体内累积,叶绿素含量急剧下降。过氧化物酶(POD)活性随着处理时间的延长而上升,经2mg/ml粗毒素处理后48hPOD就达到最大,比对照提高了6.19倍,1mg/ml粗毒素处理的则在处理后96h达到最大;2mg/ml粗毒素处理后SOD出现两个活性高峰,其中在处理后72h的高峰最大,此时SOD活性较对照提高了180.1%,显著高于对照;CAT在处理后48h有一个活性高峰且高于对照;粗毒素处理后空心莲子草叶片中PAL、PPO活性与对照的无显著性差异;1mg/ml粗毒素处理后72h,空心莲子草叶片的ROS产生速率达到最大,随后ROS产生速率急剧下降。
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