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石英粉尘的长期暴露会导致肺部炎性反应及弥漫性纤维化,这与石英粉尘引起的机体免疫失衡相关。TAM受体家族(包括Tyro3、Axl和Mer三种受体)与其配体生长停滞特异性蛋白6(Growth Arrest Specific protein 6, Gas6)组成TAM/Gas6通路,对机体免疫反应有负性调节作用。本研究拟结合动物实验和人群研究,探讨TAM/Gas6通路在石英粉尘致肺炎性及纤维化反应中的作用。第一部分TAM/Gas6通路在石英粉尘所致小鼠肺部炎性反应中的作用目的：探究TAM/Gas6通路在石英粉尘所致小鼠肺部炎性反应中的作用。方法：通过气管滴注的方法制作小鼠肺部暴露模型,共分为8组：①生理盐水对照组,滴注无菌生理盐水；②石英粉尘暴露组,滴注石英粉尘悬液；③非特异性抗体组,滴注石英粉尘悬液及非特异性抗体；④Tyro3、Axl或Mer阻断组,滴注石英粉尘悬液及Tyro3、Axl或Mer的特异性抗体；⑤Gas6补充组或阻断组,滴注石英粉尘悬及重组小鼠Gas6蛋白(recombinant murine Gas6, rmGas6)或Gas6的特异性抗体。滴注操作后小鼠定期腹腔注射相应抗体或蛋白,于第7、28和84天处死。提取左肺制作病理切片,免疫组化和H&E染色后观察不同组肺组织TAM/Gas6激活水平、炎性浸润情况并进行评分。收集小鼠肺泡灌洗液,测定、比较其中乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase, LDH)和总蛋白(Total Protein, TP)、巨噬细胞和中性粒细胞计数、白细胞介素(Interleukin,IL)-1β和肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor, TNF)-α水平。结果：免疫组化结果表明,与生理盐水组比较,石英粉尘暴露组小鼠肺组织中磷酸化TAM受体水平升高。与各时点石英暴露组或非特异性抗体组比较,阻断Tyro3、Axl、Mer或Gas6后小鼠肺泡灌洗液中LDH及TP、巨噬细胞及中性粒细胞计数、IL-1p及TNF-α水平、切片炎性反应评分显著增高(P<0.05或P<0.01)。补充rmGas6后,以上炎性指标显著下降(P<0.05或P<0.01)。横向比较TAM受体三个阻断组小鼠肺部炎性反应增强程度,以Mer阻断组最为显著。结论：石英粉尘的暴露会导致小鼠肺组织TAM/Gas6通路激活程度升高。TAM/Gas6通路,尤其是Mer受体,可能在石英粉尘导致的肺部炎性反应起重要的负性调控作用。第二部分TAM/Gas6通路在石英粉尘所致小鼠肺部纤维化病变中的作用目的：探究TAM/Gas6通路在石英粉尘所致小鼠肺部纤维化病变中的作用。方法：通过气管滴注方法制作小鼠暴露模型,具体方法及分组同第一部分。气管滴注后第7、28和84天分别处死各组小鼠,通过RT-PCR法测定肺组织中纤连蛋白和胶原蛋白Ⅰ的mRNA表达水平,通过蛋白质印迹法测定其蛋白表达水平。提取小鼠左肺制作病理切片,Masson染色后镜下观察其纤维化水平并评分。结果：气管滴注后第84天,与石英暴露组或非特异性抗体组比较,Tyro3、Axl、 Mer及Gas6阻断组小鼠肺组织纤连蛋白和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白水平、Masson染色后纤维化评分均显著升高(P<0.05或P<0.01)；而Gas6补充组小鼠的以上各纤维化反应指标显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论：TAM/Gas6通路可能对石英粉尘导致的肺部纤维化病变起负性调控作用。第三部分矽肺病例-对照人群外周血中TAM/Gas6的表达水平及作用探讨目的：通过病例-对照研究,探讨机体外周血中TAM/Gas6的表达与矽肺发病或进展危险性间的关系。方法：本研究纳入对象均来自湖北省黄石地区某矿区。病例组为50名男性矽肺患者(包括Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者19人、21人和10人)。对照组为48名有石英粉尘暴露史的健康男性(接尘对照组)和49名无接尘史健康男性(非接尘对照组)。不同组别人群年龄、体重指数、吸烟及饮酒状况匹配。采集研究对象空腹外周血,通过RT-PCR法测定外周血白细胞中TAM/Gas6的mRNA表达水平；通过酶联免疫吸附试验测定血浆中Gas6蛋白的表达水平。采用多元Logistic回归分析外周血TAM/Gas6表达水平与矽肺患病及进展危险性间的关系。结果：与非接尘对照组比较,接尘组与矽肺组外周血白细胞中Tyro3及AxlmRNA水平显著升高(P<0.01);而外周血白细胞中Gas6 mRNA水平显著降低(P<0.05)。多元Logistic回归分析发现,机体外周血白细胞Tyro3和Axl mRNA水平的增高及Gas6 mRNA水平的降低与矽肺的患病存在关联[Tyro3-mRNA OR=5.13 (2.65-9.95); Axl-mRNA OR=1.90 (1.01-3.58); Gas6-mRNA OR=0.19 (0.10-0.37)].Ⅲ期矽肺患者Gas6的mRNA表达水平较Ⅰ期、Ⅱ患者显著降低(P<0.05)；但多元Logistic回归分析发现TAM/Gas6表达水平的变化与矽肺期别进展危险性间无显著关联。结论：机体外周血白细胞中Tyro3及Axl mRNA水平的升高或Gas6 mRNA的降低与矽肺患病危险性之间可能存在关联。本研究的主要创新之处包括：(1)首次通过体内实验探讨了TAM/Gas6通路在石英粉尘引起的肺部炎性及纤维化反应中的负性调控作用,深入了对石英粉尘所致肺部病变相关机制的理解；(2)通过体内实验,同时研究了TAM三种受体(即Tyro3、 Ax1和Mer受体)在石英粉尘致肺部炎性及纤维化过程中的作用,发现三者均能对相关病变起到负性调控功能,且以Mer的作用最为明显,避免了既往研究只研究一种受体的局限性;(3)结合动物体内实验和人群流行病学研究两种研究方法,均证实TAM/Gas6通路与矽肺的发生、发展间存在关联。本研究的不足之处主要有：(1)人群研究只测定了人群外周血中TAM/Gas6的表达水平,而人体肺部(如矽肺病人肺泡灌洗液或支气管活检组织等)TAM/Gas6的表达水平仍需进一步测定；(2)病例-对照研究所纳入研究对象的样本量较小,所得结论需要在更大样本的人群或前瞻性队列研究中进一步验证。