【摘 要】
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目的:蛇床子素是从蛇床中提取出来的一种物质,发挥广泛的药理活性,并且已经被用来治疗多种疾病。角膜新生血管(Corneal neovascularization,CoNV)的形成严重威胁人类的视觉,它与多种眼部疾病如角膜炎、沙眼等密切相关。本研究旨在探讨蛇床子素在CoNV中的抗新生血管的作用及机制。方法:1、在体内实验中,采用HE染色法检测Osthole对角膜组织结构的影响。构建小鼠碱烧伤模型诱导角
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目的:蛇床子素是从蛇床中提取出来的一种物质,发挥广泛的药理活性,并且已经被用来治疗多种疾病。角膜新生血管(Corneal neovascularization,CoNV)的形成严重威胁人类的视觉,它与多种眼部疾病如角膜炎、沙眼等密切相关。本研究旨在探讨蛇床子素在CoNV中的抗新生血管的作用及机制。方法:1、在体内实验中,采用HE染色法检测Osthole对角膜组织结构的影响。构建小鼠碱烧伤模型诱导角膜新生血管,实验分为3组:碱烧伤PBS处理组、碱烧伤羧甲基纤维素钠(CMC-Na)处理组、碱烧伤蛇床子素(Osthole)处理组。通过显微裂隙灯观察角膜碱烧伤模型第7天或第10天时CoNV的数量和长度;2、在体外实验中,采用MTT实验检测不同浓度Osthole处理后人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)活力;采用Calcein-AM/PI染色法检测Osthole对细胞凋亡的影响。实验分为4组:正常对照组(Ctrl)、VEGF处理组、VEGF和蛇床子素(Osthole 5μM)处理组、VEGF和蛇床子素(Osthole 25μM)处理组。利用Ed U、Ki67实验分析细胞增殖情况;利用Transwell以及划痕实验分析细胞迁移情况;利用成管实验研究细胞成管能力。3、提取各组细胞蛋白,利用Western blot研究Osthole在CoNV中抗新生血管的分子机制。结果:1、在体内,Osthole眼药水(200μM)对角膜组织无毒性作用,不引起角膜组织结构的改变。在小鼠碱烧伤模型中,Osthole显著减少新生血管的数量和长度。2、在体外,低浓度的Osthole(0.05-50μM)对HUVECs细胞没有毒性。工作浓度(5μM和25μM)下,Osthole不会引起HUVECs细胞凋亡。工作浓度下Osthole能抑制VEGF诱导的HUVECs细胞的增殖、迁移和成管能力。3、Osthole通过抑制MAPK信号通路的激活,减少CoNV形成。结论:Osthole通过调节MAPK信号通路来抑制VEGF诱导的HUVECs细胞的增殖、迁移和成管,进而发挥抗CoNV的作用。Osthole有望成为治疗CoNV的新药。
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