研究目的本课题通过建立大鼠成骨细胞体外培养实验模型,在细胞和分子水平上观察葛根素对大鼠成骨细胞增殖、分化及基因表达的影响,探讨葛根素防治绝经后骨质疏松症的作用机制,为葛根素应用于临床防治绝经后骨质疏松症提供实验依据。方法1.采用多次酶消化法分离新生24h内大鼠颅盖骨进行大鼠原代成骨细胞体外培养,通过相差显微镜观察成骨细胞形态,并用碱性磷酸酶染色方法对所获得的细胞进行鉴定。2.采用MTT法观察葛根素对大鼠成骨细胞的影响3.采用RT-PCR的方法观察葛根素对大鼠体外培养成骨细胞OPG和RANKL mRNA表达的影响结果1.新生大鼠成骨细胞体外培养模型建立成功,证实所培养细胞具有体内成骨细胞的形态学和生物学特性。2.不同浓度的葛根素(10-4μmol/L～100μmol/L)作用于大鼠成骨细胞24h和48h均表现出显著的促增殖作用；培养72h及96h,实验结果显示各浓度组均无明显的增殖作用。3.葛根素可明显地促进大鼠成骨细胞OPG mRNA的表达,抑制RANKL mRNA的表达。结论1.不同浓度的葛根素作用于大鼠成骨细胞表现出明显的增殖作用,其增殖的大小与葛根素浓度及作用时间有密切的关联。2.葛根素可以上调OPG基因的表达,下调RANKL基因的表达,从而调节骨吸收,这可能是葛根素防治绝经后骨质疏松症的重要机制之一。3.葛根素可以促进大鼠成骨细胞的增殖及增强OPG/RANKL mRNA表达的水平,这可能是葛根素防治绝经后骨质疏松症的作用机制,为葛根素的应用提供了实验依据,而且为发掘新的抗骨质疏松药物提供了线索。