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单增李斯特菌是革兰氏阳性菌，可引起人畜共患疾病。近年来由这种菌引起的食品安全事件越来越多，它的危害也越来越受到人们的关注。但是应用于检测单增李斯特菌的现有方法存在着很多限制因素，不能满足快速发展的食品行业现实需求，因此需要开发一种快速、方便的单增李斯特菌检测方法。作为一种新型的核酸扩增技术，环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）应用四条引物识别靶基因，特异性更好、灵敏度更高、检测速度更快，特别适合用于检测病源微生物，因此继续研究和完善此方法具有深远的现实意义。为了简化LAMP产物检测程序，开发出来的罗丹明B衍生物可以在扩增之前加入到反应体系中，阴性（红色）阳性（蓝色）颜色对比明显，与2%琼脂糖凝胶电泳分析结果一致。为了快速检测单增李斯特菌，使用叠氮溴化乙锭（EMA）处理该菌培养液，以李氏溶血素基因（hlyA）为靶基因，罗丹明B衍生物作为反应指示剂，通过优化指示剂、镁离子等浓度，建立了LAMP检测体系。25μL LAMP反应体系成分：2μLDNA模板；内引物各1.6μmol/L（FIP和BIP）；外引物各0.2μmol/L（F3和B3）；环引物各0.8μmol/L（LF和BF）；1×Thermopolreaction buffer；BstDNA聚合酶8U；3mmol/L的MgCl2；0.6mol/L的Betaine；1mmol/L的dNTPs；罗丹明B衍生物4.14×10-5g/mL，在65℃分别孵育60min，最后在80℃加热10min终止反应。在人工污染的牛乳中，单增李斯特菌的LAMP检测限为1.08×101cfu/mL，其灵敏度是PCR法的10倍，与GB4789.30-2010相比，准确度为100%。将液态LAMP反应体系（无BstDNA聚合酶、无DNA模板）分为添加罗丹明B衍生物和无罗丹明B衍生物两组，放置于室温下，定期取样进行扩增反应，直到取出的样品不能扩增为止；对于失去扩增活性的样品补加关键组分，探究失活主要因素。结果发现罗丹明B衍生物水溶液状态不稳定，需要现用现配；无罗丹明B衍生物的液态LAMP反应体系有效期为8d；失去扩增活性的主要限制因素是引物，其次为dNTPs。将上述两种LAMP反应体系在-20℃预冻12h，再真空冷冻干燥制成干粉，然后重复操作，探究干粉LAMP反应体系在室温下的有效期以及失活的主要因素。结果发现含有罗丹明B衍生物的LAMP反应体系不能扩增，无罗丹明B衍生物的LAMP反应体系可以扩增，有效期为30d，失去扩增活性的主要限制因素是Thermopol reaction buffer。为了避免肉眼观察带来的误差，对含有罗丹明B衍生物的LAMP反应体系加热不同时间后，用DU800Nueleic acid/Protein ANALYZER做波长扫描，结果发现加热扩增60min，在660nm处，Abs大于0.72的为阳性，反之则为阴性。综上所述，可视化LAMP法快速检测原料乳中单增李斯特菌是可行的。