论文部分内容阅读
前列腺素是花生四烯酸的环氧合酶代谢产物,.为二十碳不饱和脂肪酸。体内分布广泛。前列腺素类化合物是动物繁殖过程中关键的调节因子,可影响生殖生理过程的多个环节,本研究旨在探讨雌激素(estrogen, E2)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E2和F2α合成酶(PGES和PGFS)表达的影响,探讨前列腺素EP受体激动剂butaprost和FP受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中环氧合酶1(COX-1)、环氧合酶2(COX-2)以及PGES和PGFS表达的影响,以及EP受体激动剂butaprost和FP受体激动剂fluprostenol对前列腺素PGE2和PGF2α合成分泌的调控作用。方法：1)建立荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞的体外培养技术,细胞传至第四代作为实验用细胞。2)用不同时间(2h、4h、8h、16h、24h和48h)和不同浓度(10-12,10-11,10-10,10-9mol/L)的雌激素E2作用于奶牛输卵管上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测上皮细胞中PGES和PGFS的mRNA表达量。3)以吲哚美辛(10-6-10-Smo1/L)消除上皮细胞中内源性前列腺素的干扰,用不同浓度(10-12-10-9mol/L)的E2作用于上皮细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测PGES和PGFS的mRNA表达量。4)分别以不同浓度(10-9-10-5mol/L)的butaprost和fluprostenol作用于奶牛输卵管上皮细胞,以吲哚美辛(10-5mol/L)消除上皮细胞内源性前列腺素的干扰,采用RT-PCR技术检测COX-1、COX-2、PGES和PGFS的mRNA表达量。5)以雌激素(10-12mol/L)和不同浓度(10-9-10-5mol/L)的butaprost和fluprostenol作用奶牛输卵管上皮细胞,用ELISA技术检测PGE2和PGF2α的合成分泌量。结果：首先,成功培养得到了奶牛输卵管上皮细胞的原代细胞和传代细胞,且第四代细胞生长良好。其次,E2在浓度为10-10mol/L作用4h和浓度为10-12mol/L作用24h时,PGES和PGFS的mRNA表达量分别与空白组对比呈显著性增高。第三,以吲哚美辛(10-6-10-5mo1/L)消除内源性前列腺素的干扰后,PGES和PGFS的mRNA表达量与空白组对比呈显著性增高,且在添加E2后,其对PGES和PGFS的表达量的增高作用更加显著。第四,分别以不同浓度(10-9-105mol/L)的butaprost和fluprostenol作用4h后,COX-1的表达与空白相比无显著性差异,COX-2的表达量与空白组对比呈显著性增高,其表达量与给药浓度呈正相关。PGES和PGFS的表达量分别与空白组对比呈显著性下降,其表达量与给药浓度呈负相关。以吲哚美辛消除内源性前列腺素的干扰后,添加butaprost和fluprostenol作用4h, COX-1、COX-2、 PGES和PGFS的表达量与单独添加butaprost和fluprostenol的结果相似。第五,E2作用下以不同浓度(10-9-10-5mol/L)的butaprost和fluprostenol作用24h后,PGE2和PGF2P的分泌量与给药量呈正相关。结论：实验结果表明,E2可促进奶牛输卵管上皮细胞前列腺素的合成,PGE2和PGF2P对COX-2具有正调控作用,对PGES和PGFS具有负调控作用,但总体上对PGE2和PGF2P的分泌具有正反馈调控作用。