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目的：三邻甲苯基磷酸酯（TOCP）在工业中广泛应用，并可导致机体的生殖毒性，但确切机制仍不甚完全清楚。本课题通过观察TOCP对体外培养的大鼠精原干细胞活性的影响，探究TOCP的雄性生殖毒性作用及其相关机理。方法：1、用MTT法检测TOCP和LPC对分离提取的9d雄性SD乳鼠精原干细胞活性的影响；2、用流式细胞仪和RT-PCR检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞周期的影响；3、用Annexin V-FITC/PI双染色法检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞凋亡的影响；4、用Western blot法检测TOCP和LPC对大鼠精原干细胞自噬蛋白的影响。结果：1、分离提取9d雄性SD乳鼠精原干细胞，分别用不同浓度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，MTT法检测细胞活性，结果显示，与对照组相比，TOCP呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞活性（P﹤0.05）。2、分别用不同浓度的TOCP（0mmol/L、0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，用流式细胞仪检测细胞周期，结果发现，TOCP对大鼠精原干细胞周期无明显影响；RT-PCR法结果显示，TOCP对细胞内相关周期蛋白P21、P27和CyclinD1mRNA的表达也无明显的影响。3、Annexin V-FITC/PI双染色法显示，与对照组（0mmol/LTOCP）相比，不同浓度（0.25mmol/L、0.5mmol/L和1.0mmol/L）的TOCP处理精原干细胞48h后，大鼠精原干细胞凋亡无明显影响。4. Westernblot法检测发现，TOCP可使大鼠精原干细胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明显增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表达量也显著增加。5、RT-PCR结果显示，TOCP呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞内NTE mRNA的表达。6、分别用不同浓度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，MTT法检测细胞活性，结果显示与对照组相比，LPC呈浓度依赖式地抑制大鼠精原干细胞活性（P﹤0.05）。7、分别用不同浓度的LPC（0μmol/L、20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）作用于大鼠精原干细胞48h后，用流式细胞仪检测细胞周期，结果发现，LPC对大鼠精原干细胞周期无明显影响；RT-PCR法结果显示，LPC对细胞内相关周期蛋白P21、P27和Cyclin D1mRNA的表达也无明显的影响。8、Annexin V-FITC/PI双染色法显示，与对照组（0μmol/L LPC）相比，用不同浓度LPC（20μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）处理精原干细胞48h，对大鼠精原干细胞凋亡无明显影响。9、RT-PCR和Westernblot法结果显示，LPC对大鼠精原干细胞内NTE蛋白及其mRNA的表达无明显影响。10、Western blot法检测发现，LPC可使大鼠精原干细胞中的自噬蛋白LC3-II/LC3-I的比例明显增加，并且使自噬蛋白Atg5和Beclin1表达量也显著增加。结论：1、TOCP可诱导大鼠精原干细胞自噬并抑制其活性，但对大鼠精原干细胞的周期和凋亡无明显影响；2、 LPC可诱导大鼠精原干细胞自噬并抑制其活性，但对大鼠精原干细胞周期和凋亡无明显影响；3、TOCP可抑制大鼠精原干细胞内NTE mRNA表达，但LPC对大鼠精原干细胞内NTE mRNA表达无明显影响；提示：TOCP可能是通过NTE/LPC途径诱导大鼠精原干细胞自噬，从而影响细胞活性。