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目的正常粘膜组织中存在着大量的共生菌,其组分和代谢物不仅能够维持免疫稳态,并且参与多种免疫性疾病的发生发展。呼吸道是一个复杂的粘膜组织,呼吸道内共生菌对于肺脏免疫应答的调控具有精密性和特异性。肺泡巨噬细胞分布于肺泡腔表面,是肺脏内最丰富的先天免疫细胞,参与肺脏的免疫应答以及免疫调节过程,在多种慢性肺脏疾病的发生发展中具有非常重要的作用。肺脏内共生菌信号能够调控肺泡巨噬细胞功能和极化状态,我们已有的研究揭示了呼吸道共生菌通过维持肺泡巨噬细胞处于M1状态,低表达CCL24,从而促进肺脏γδT17细胞抗肿瘤免疫应答。LncRNA是巨噬细胞免疫稳态和功能的重要调控分子。已有研究证实多种LncRNA在维持先天免疫和特异性免疫细胞稳态和功能中发挥重要作用,并且与机体多种疾病的发生发展密切相关,已有研究表明LncRNA对巨噬细胞的炎症反应及巨噬细胞的极化等具有调控作用。因此,探讨共生菌对小鼠肺泡巨噬细胞LncRNA表达的调控作用具有重要意义。本研究旨在检测LncRNA在共生菌群缺失小鼠肺泡巨噬细胞中的表达水平,以及其对CCL24以及Arg1表达的调控作用,为深入理解共生菌调控肺脏免疫稳态的分子机制提供有力的证据。方法使用含有组合抗生素的饮用水饲喂小鼠建立共生菌缺失小鼠模型,通过流式细胞技术对共生菌缺失小鼠以及正常小鼠的肺泡巨噬细胞进行分离和纯化,利用LncRNA芯片技术筛选出差异表达的LncRNA并进行GO和KEGG生物信息学分析预测其靶基因,然后采用RT-PCR方法对结果进行验证。利用FISH技术对RAW264.7巨噬细胞中LncRNA-30162进行亚细胞定位,采用RNA干扰方法敲除LncRNA-30162的表达,并检测其对RAW264.7细胞基因表达的调控,最后通过ELISA方法对结果进行蛋白水平的验证。结果1.分选后的肺泡巨噬细胞纯度大于95%,与正常小鼠相比较,共生菌缺失小鼠肺泡巨噬细胞中差异表达LncRNA共有634个,其中表达上调363个,表达下调271个(变化倍数≥2,p<0.05)。2.共生菌缺失小鼠肺泡巨噬细胞差异表达LncRNA靶基因与多种生物信息学通路有关,包括免疫系统的调控、细胞分化、趋化作用等。3.敲低RAW264.7细胞中LncRNA-30162的表达,可以明显降低CCL24、Arg1的表达水平,而TIMP1、IGF1和MMP12表达无明显变化。结论1.共生菌可以调控小鼠肺泡巨噬细胞多种LncRNA的表达,差异表达的LncRNA与免疫系统的调控、细胞分化、趋化作用等密切相关。2.LncRNA-30162可以调控RAW264.7巨噬细胞CCL24、Arg1的表达。