用于可卡因和ATP检测的新型核酸适体电化学传感器研究

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在食品质量安全检测领域中一项高效、高灵敏度、高选择性的检测方法必不可少。核酸适配体电化学传感器的优势有:检测速度快、检测成本低廉、检测操作简便、检测结果具备较高特异性和高选择性。因此将核酸适配体电化学传感器应用于食品质量安全分析领域,可大幅提高食品的检测速度。目前关于核酸适配体电化学传感器的研究工作大多集中于灵敏度的优化,而缺少对传感器工作效率的提升。本文为更好的解决核酸适配体电化学传感器存在的检测速度过慢、灵敏度较低等问题,主要做了以下两部分的研究内容。第一部分是“基于一步竞争结合的可卡因核酸适配体电化学传感器”,第二部分是“基于协同稳定双链核酸适配体探针的ATP电化学传感器”。这两种方法都构建了一项更加快速、灵敏的核酸适配体传感器检测平台,本论文的主要研究内容与结果如下:(1)基于一步竞争结合的核酸适配体电化学传感器的设计与应用。详细对比了传统置换型核酸适配体电化学传感器与一步竞争型核酸适配体电化学传感器对可卡因的检测性能。研究结果发现,一步竞争型核酸适配体电化学传感器在检测速度和信号增益两方面均优于传统置换型核酸适配体电化学传感器。接着实验设计了一步竞争型可卡因核酸适配体电化学传感器,并探究了互补链的长度、互补链的浓度以及核酸适配体链的固定浓度对传感器信号增益的影响。该传感器在最优实验条件下的检测性能:传感器对目标分子可卡因的响应时间为15分钟,传感器用于可卡因定量分析的线性方程为SI/%=1.39939×[Cocaine]μM+12.11468(R~2=0.99375),线性范围为0.5~100μM(200倍)。在实际样品的加标回收率均高达94%以上。实验的结果足以表明,一步竞争型可卡因核酸适配体电化学传感器的设计方案行之有效,能够有效的将传感器的灵敏度和响应速度提高,实际应用于样品中可卡因的检测也有较高的准确性。(2)协同稳定双链核酸适配体电化学传感器的设计与应用。首先探究了在协同稳定双链核酸适配体电化学传感器中,互补链的长度以及其位置对协同稳定双链核酸适配体电化学传感器的检测性能是否会有影响。研究结果发现,当互补链呈“5+X”(5表示非适体碱基序列,X表示与适体互补的碱基个数)的结构时,核酸适配体与ATP之间的结合空间位阻会大幅降低,因而目标分子ATP能更快的解开双链结构并完成置换反应,该电化学传感器的响应速度也会因此而快速提升。当互补链长度(5+7,5+6,5+5碱基对)减少时,传感器界面的背景抑制也会依次减弱。实验最后确定当互补长度为“5+6”个碱基对时,协同稳定双链核酸适配体电化学传感器的响应值为最佳。接着又优化了互补链的浓度、测试缓冲溶液中盐离子的浓度以及方波伏安测试频率对该传感器信号增益的影响。实验结果表明,传感器采用最优实验条件时其检测性能:对目标分子ATP的响应速度为1分钟,用于ATP定量分析的线性方程为SI/%=1.5041×[ATP]/μM+19.02(R~2=0.9986),线性范围为0.5~100μM(200倍)。该传感器在复杂混合物中,能特异性识别目标分子ATP,并在实际样品中测得的加标回收率均高达97%以上。实验的结果足以表明,双链协同ATP核酸适体电化学传感器的设计方案能将适体传感器的灵敏度和响应速度大大提高,实际应用于样品中ATP的检测也有较高的准确性。
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