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目的:通过建立大鼠热休克及肝脏缺血再灌注模型,研究HSP70进入细胞核与PARP-1结合,在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用。方法:选择健康的雄性Sprague Dawley (SD)大鼠,体重在180g-250g之间,随机分为5组:HSP70抑制组(H-/P+组),通过槲皮素抑制HSP70的高表达;阴性对照组(NC组);热休克组(H+/P+组),通过热休克促进HSP70的高表达;阳性对照组(PC组)即肝脏缺血再灌注组,Pringle法建立肝脏缺血再灌注模型;PARP-1抑制组(H+/P-组),通过3-AB抑制PARP-1的表达。各组造模成功后取肝脏组织及血液样本,分析各组大鼠血生化指标改变,Western blot分析HSP70与PARP-1的表达情况,免疫共沉淀分析HSP70与PARP-1的结合情况,肝脏标本HE染色观察组织形态学改变。结果采用专业图像分析软件进行分析,用SPSS18.0软件进行统计分析。结果:1.用自动生化仪检测血清学标本,统计软件分析结果示各个组相互比较均有显著性差异,P<0.01,有统计学意义。PC组血清ALT值最高,与其余各组比较有显著性差异,P<0.01;H+/P+组与H-/P+组、H+/P-组比较有显著性差异,P<0.01,血清ALT值较低;H-/P+组与H+/P-组比较血清ALT值高,有显著性差异,P<0.01;表明细胞核中HSP70与PARP-1均可发挥肝功能保护作用,HSP70对肝功能的保护作用强于PARP-1。2.通过提取细胞核中HSP70行Westren blot检测,证实HSP70进入细胞核中,且明确了各处理组中HSP70的表达情况。统计分析示:H+/P+组与H+/P-组比较无显著性差异,P>0.05;H-/P+组与PC组比较无显著性差异,P>0.05;H+/P+组、H+/P-组与其他组比较,Hsp70的表达增高,有显著性差异,P<0.01;NC组与其余组比较均有显著性差异,P<0.01,只有少量Hsp70的表达;表明热应激、缺血再灌注损伤均可促进HSP70表达,槲皮素起到了抑制HSP70的表达。3.提取细胞核中PARP-1行Westren blot检测,统计分析各组PARP-1表达情况:H+/P+与其余组比较有显著性差异,P<0.01,表达明显增多;H-/P+组与PC组、NC组及H+/P-比较有显著性差异,P<0.01,PARP-1表达增多;H+/P-组与PC组、NC组比较PARP-1表达量多,有显著性差异,P<0.01;PC组与NC组比较有显著性差异,P<0.01;表明热休克及缺血再灌注损伤均促使细胞核PARP-1的表达,3-AB达到了抑制PARP-1的过表达。4.免疫共沉淀检测:提取各组大鼠肝脏细胞核蛋白,分别用PARP-1、HSP70抗体免疫沉淀,再行Western blot分析,结果示:在70kDa和29kDa处各出现一条带,为HSP70和PARP-1蛋白,证实了细胞核中HSP70与PARP-1复合物的存在。表明了在热休克及缺血再灌注损伤等应激时,HSP70进入细胞核中与PARP-1结合。5.HE染色结果显示:NC组(空白对照组)肝小叶结构基本正常,肝小叶中央静脉、肝窦结构清晰可见,汇管区无明显的中性粒细胞浸润,肝窦无明显淤血;PC组(缺血再灌注组)肝细胞明显肿胀,肝窦狭窄、淤血,肝小叶中央静脉淤血,肝细胞索及肝窦分界不清,汇管区见中性粒细胞浸润;H-/P+组(HSP70抑制组)、H+/P-组(PARP-1抑制组)及H+/P+(热休克组)肝细胞损伤病理改变介于NC组与PC组之间。结论:1.热应激、缺血再灌注损伤促进细胞HSP70与PARP-1的表达;2.HSP70进入细胞核与PARP-1蛋白结合,发挥肝细胞保护作用;3.抑制PARP-1的表达可减少细胞凋亡;