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目的:观察二甲双胍是否可以减轻顺铂导致的颗粒细胞损伤,探讨二甲双胍在顺铂导致颗粒细胞损伤中的保护作用及其可能机制。方法:1. 颗粒细胞培养及鉴定:选取卵巢功能正常因男方因素或输卵管因素行体外受精-胚胎移植的患者,取卵时留取卵泡液,离心分离出颗粒细胞。将颗粒细胞用含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基置于培养箱中培养。采用免疫细胞化学法鉴定人卵巢颗粒细胞FSHR的表达。2.在体外人卵巢颗粒细胞培养体系中,加入不同浓度顺铂（2.5μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L）作用24小时后通过CCK8检测方法筛选出最佳损伤浓度。分别采用不同浓度二甲双胍（1m M、2m M、5m M、10 m M、20 m M）预先保护2小时后,加入终筛选出的最佳损伤浓度顺铂作用24小时后,通过CCK8检测方法筛选二甲双胍的最佳保护浓度。3.实验共分为3组,分别为对照组:正常培养基培养24小时。实验组:含1 m M二甲双胍培养基预先处理2小时,加入终浓度10μg/m L顺铂继续培养24小时。模型组:含10μg/m L顺铂的培养基培养24小时,4.采用化学发光法测定三组颗粒细胞上清液雌二醇水平;生物化学法测定细胞内超氧化物歧化酶活性（SOD）;流式细胞术测定颗粒细胞内活性氧活性（ROS）和线粒体膜电位（MMP）;Western blot和实时荧光定量PCR法检测凋亡分子Bcl-2、Bax蛋白表达和m RNA水平变化。结果:1.颗粒细胞培养及鉴定:颗粒细胞24小时后贴壁,48-72小时处于对数增长期。倒置显微镜下可见细胞成团簇分布,细胞呈锥形、长梭形或不规则多边形类似于成纤维细胞形态,细胞与细胞之间通过延长伸出的伪足样突起连接,胞内可见大量颗粒样物质,胞浆饱满。免疫细胞化学法鉴定结果:细胞核成蓝色,胞浆成棕褐色着色,FSHR阳性率高于90%。提示:实验分离培养细胞为人卵巢颗粒细胞。2. 顺铂损伤浓度筛选:CCK8检测结果显示不同浓度顺铂（2.5μg/m L、5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L）处理24小时后颗粒细胞抑制率分别为（16.30±1.47）%、（25.50±11.53）%、（36.89±1.68）%、（52.92±1.22）%,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。在给药时间相同时,随着顺铂浓度增加细胞抑制率也升高,且呈剂量依赖性。我们选择抑制率小于50%其最接近于50%的浓度10μg/m L作为后续模型组给药浓度。3. 二甲双胍最佳保护浓度筛选:不同浓度二甲双胍（1 m M、2 m M、5 m M、10 m M、20 m M）预处理2小时后颗粒细胞存活率分别为（85.39±1.59）%、（72.86±4.39）%、（42.54±0.83）%、（34.77±2.69）%、（28.80±2.25）%,浓度1 m M、2 m M、5 m M组差异有统计学意义（P<0.05）。在给药时间相同时,与10μg/m L顺铂组（64.83±2.10）%相比,随着不同二甲双胍浓度对细胞的活力影响不同,其中1 m M和2 m M浓度可以显著提高细胞活性,差异有统计学意义（P<0.05）。而大于5 m M时细胞存活率明显下降。因此选择存活率最高浓度为1 m M为最佳保护浓度。4.二甲双胍预处理对顺铂诱导颗粒细胞激素水平影响:与对照组相比,模型组E2水平显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组相比,实验组E2水平明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）。而实验组与对照组相比,E2水平仍然低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）5. 二甲双胍预处理对顺铂诱导颗粒细胞氧化应激水平的影响:与对照组相比,模型组中颗粒细胞超氧歧化物酶活性下降;活性氧水平升高;线粒体膜电位降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,实验组中颗粒细胞超氧歧化物酶活性增加;活性氧水平降低;线粒体膜电位升高,差异有统计学意义（P<0.05）。而实验组与对照组相比,实验组超氧歧化物酶活性,活性氧水平,线粒体膜电位水平均未达到正常,差异有统计学意义（P<0.05）。6. 二甲双胍预处理对顺铂诱导颗粒细胞凋亡相关分子的影响:Western blot和PCR检测一致,其结果显示,与对照组相比,模型组抗凋亡分子Bcl-2的蛋白水平和m RNA水平表达均减少,促凋亡分子Bax的蛋白水平和m RNA水平表达增加,差异有统计学意义（P<0.05）;与模型组相比,实验组Bcl-2表达增加,Bax表达显著减少,差异有统计学意义（P<0.05）。而与对照组相比,实验组蛋白Bcl-2、Bax表达均为恢复至正常水平,差异有统计学意义（P<0.05）结论:1.顺铂诱导颗粒细胞损伤模型表现为细胞活力下降,雌激素水平降低。2.二甲双胍预处理后对颗粒细胞损伤有保护作用。3.二甲双胍预处理改善了顺铂诱导颗粒细胞损伤,其机制可能与二甲双胍能够减少活性氧,改善线粒体功能,抑制氧化应激反应和激活Bcl-2抗凋亡途径相关。