B7基因修饰后的鼠胶质瘤细胞C6体外对脾淋巴细胞的激活作用及在鼠体内致瘤性的实验研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:davidcao1980
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机体抗肿瘤免疫主要是T细胞介导的细胞免疫,T细胞的活化增殖是这一免疫反应的关键。肿瘤免疫学研究表明:肿瘤逃避机体免疫监视的机制之一可能是因为肿瘤细胞表面缺乏使T细胞完全活化的共刺激信号。许多实验已证实:向肿瘤细胞中导人B7共刺激信号基因,可以激活机体免疫系统,增强机体的抗肿瘤免疫能力。 实验目的:我们将外源性的B7基因导入鼠恶性胶质瘤细胞系C6中,一方面研究B7基因在体外对脾淋巴细胞的激活增殖作用;另一方面研究B7基因修饰后的C6细胞在大鼠体内(皮下和颅内)致瘤性的变化。 实验方法:在本实验中,我们构建了一套含有B7基因的逆转录病毒表达系统(pLXSN-B7)。通过脂质体(Liposome)介导基因转移方法,将含有B7cDNA的逆转录病毒质粒导入具有免疫原性的C6细胞中。将B7基因修饰后的B7-C6细胞(实验组)和空载体转染的V-C6细胞、C6细胞(对照组)在体外分别与荷瘤鼠脾淋巴细胞混合培养,利用[3H]TdR掺入法研究和比较这三种肿瘤细胞体外对脾淋巴细胞的激活增殖作用。在此基础上,进一步用常规接种和立体定位接种的方法,将上述细胞分别接种到Wistar大鼠腋窝或腹股沟皮下(每组10只,每只接种0.1ml,5×107/ml肿瘤细胞数)及颅内左额叶(每组15只,每只接种0.05ml,1×108/ml肿瘤细胞数),观察B7基因修饰和未修饰的C6细胞在大鼠体内(皮下和颅内)致瘤性的变化。 实验结果:通过PCR、RNA-slot和免疫荧光等方法证实B7基因
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