论文部分内容阅读
[背景]：妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)是妊娠期特有的并发症,至今仍缺少有效的防治措施。ICP最显著的特点就是孕母血胆汁酸水平增高,研究证明高水平的胆汁酸是增加胎儿风险的重要因素。高胆汁酸不仅见于母血,其胎儿脐血、羊水胎粪的胆汁酸水平相比正常孕妇也显著增高,提示胎盘胆汁酸转运异常是ICP危害胎儿的重要机制。有机阴离子转运体OATP1B3存在于胎盘组织并具有胆汁酸和胆红素转运功能,本课题组前期研究表明ICP孕妇胎盘组织中OATP1B3表达下调,首次利用体外滋养细胞模型研究发现OATP1B3能特异性的转运GCA、 GCDCA两种胆汁酸。多项研究表明胎盘中OATP1B3参与了母胎间胆汁酸的转运,研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧胆酸(UDCA)对滋养细胞OATP1B3的表达的影响具有重要的临床意义,这将为人类胎盘滋养细胞胆汁酸转运特征及胎儿风险防范提供理论依据。[目的]：研究s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧胆酸(UDCA)对胎盘滋养细胞OATP1B3表达的影响,为人类胎盘滋养细胞胆汁酸转运特征及胎儿风险防范提供理论依据。[方法]：应用MTT法检测s-腺苷蛋氨酸(SAMe)和熊去氧胆酸(UDCA)对SWAN细胞的增殖作用,以不同的药物浓度作用于SWAN细胞不同的时间,用RT Real-time PCR和Western blot检测药物对OATP1B3的mRNA和蛋白表达的影响。[结果]：(1)MTT法：UDCA以20μM、50μM浓度作用24h、48h、72h对细胞无明显毒性作用(P>0.05); SAMe以5μM、10μM、15μM、20μM、35μM浓度作用24h、48h、72h对细胞无明显毒性作用(P>0.05);(2) UDCA、SAMe对OATP1B3表达的影响：a. Real-time PCR检测20μM.50μMUDCA作用于swan细胞24h后OATP1B3mRNA表达分别上调了14%、20%,48h后分别上调了43%、66%,其中50μMUDCA处理组和对照组差异有明显的意义(P<0.05);15μM35μM的SAMe作用于swan细胞24h后mRNA分别上调了83%、320%(P<0.05)。15μM、35μM的SAMe作用于swan细胞48h后分别上调了48%、191%(P<0.05)。15μMSAMe24h、48h组和35μMSAMe24h、48h组分别比较差异有统计学意义(P《0.05). b.Western blot检测20μM、50μMUDCA作用于swan细胞48h后OATP1B3蛋白表达分别上调了1%、146%,其中50μMUDCA组差异有统计学意义(P<0.05)；Western blot检测15μM、35μM的SAMe作用于swan细胞48h后OATP1B3蛋白表达分别上调了31%、28%(P<0.05)；[结论]：(1)UDCA在50μM以下浓度72h内对Swan细胞没有明显的毒性作用；SAMe在35μM以下浓度72h内对Swan细胞没有明显的毒性作用。(2)熊去氧胆酸(UDCA)和腺苷蛋氨酸(SAMe)可以上调胎盘滋养细胞OATP1B3mRNA的表达,并具有浓度和时间效应。(3)熊去氧胆酸(UDCA)和腺苷蛋氨酸(SAMe)可以上调胎盘滋养细胞OATP1B3蛋白的表达。