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沟叶结缕草(Zoysia matrella(L.)Merr.),又称马尼拉草,具有植株低矮、叶细色美、草层厚密、覆盖度好、根系发达、分蘖力强、耐践踏、耐盐碱等优点,用它培育的草坪柔软、嫩绿,既可用作城市绿化的观赏性草坪,又可用作体育场草坪,是一种比较优良的暖季型草坪草。然而沟叶结缕草也存在生长缓慢、生长期短,抗寒性和抗旱性较差等缺点,改良其抗性指标、扩大坪用范围势在必行。组织培养技术在草坪上的应用和研究,除了为繁殖少量的优良种质外,主要是进行遗传育种探索。本研究建立了沟叶结缕草的无菌苗体系,同时对沟叶结缕草愈伤组织的诱导进行系统研究,为进一步建立其植株再生体系、进行生物工程遗传改良奠定基础,取得的主要成果如下: 1.本实验就沟叶结缕草的外植体消毒、取材时期与方法等问题进行了探讨,确立了最适的消毒方法,即:首先对带芽茎段进行预处理,而后用70%酒精表面消毒45s,结合加有约0.1%Tween-80的0.1%升汞处理8min,污染率和褐化率较低,分别为7.52%和9.73%;选择在初春返青至初夏时采集外植体材料,无论是在愈伤组织诱导还是腋芽萌动上都较容易。 2.诱导腋芽增殖的结果显示:接种后6-8天,腋芽部位开始逐渐膨大,15-20天左右腋芽萌发,后在节的部位逐渐形成深绿色的梢丛,30天后梢丛伸长到1-4cm,腋芽的数量也增至1-7个不等,腋芽增殖最适培养基为MS+0.2mg/LIBA+2.0mg/LBA,平均分化芽数6.57个,平均苗高为4.8cm,差异极显著。 3.沟叶结缕草无菌苗的最适生根培养基为MS+0.1mg/LNAA+0.3mg/LIBA。将均匀一致的梢丛转到生根培养基上。约10-15天后,陆续长出白嫩的细根,生根率为100%,30天后统计其根长和数量,每丛平均根数为12.5个左右,不定根的伸长较快,平均根长为3.17cm。 4.在含有2,4-D的不同培养基上均可诱导出白色絮状、光滑疏松的愈伤组织,其中MS+2mg/L2,4-D+0.2mg/LKT+200mg/LPro+500mg/LCH对愈伤组织的诱导最为适宜,诱导率为68.2%,16天后才开始出愈伤组织的褐化现象。 5.光照条件对愈伤组织诱导有显著影响。光培养条件下,沟叶结缕草带芽茎段接种到诱导培养基上8.5天即可产生愈伤组织,12.5天后达到出愈高峰,愈伤组织多为水渍状、疏松,12.5天时即开始出现褐化;而暗培养条件,接种后第16天才逐渐产生愈伤组织,21.5天达到高峰,22天开始50%的愈伤组织出现褐化情况,但两种条件下的诱导率相差不大。