圆环病毒(Porcine circovirus, PCV)属圆环病毒科(Circoviridae)圆环病毒属成员,为单股、环状、负链、无囊膜的DNA病毒,是已知的最小动物病毒之一,大小约17～20nm,呈二十面体对称。根据病毒抗原性、基因组成不同,可将其分为2个基因型或称血清型,即PCV1型和PCV2型。PCV1无致病性,PCV2具有致病性,是断乳仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)等相关疾病的主要病原。PCV2基因组全长1767bp或1768bp,包括11个读码框,其中ORF2编码PCV2的主要结构蛋白Cap蛋白,该蛋白具有较强的免疫原性,核苷酸序列同源性与PCV1相比仅为66%,与PCV1的血清没有交叉反应性,适合用于血清学的检测,ORF2的特性使其能成为在分子水平上诊断PCV2的理想抗原。PCV2 N端41个氨基酸与Cap蛋白的核内定位密切相关,其中12～18位及34～41位的氨基酸对Cap蛋白的核内定位起着决定性作用。根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的ORF2基因,通过BamH I/ HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,于大肠杆菌M15中转化。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达,表达量占全菌体的55.9%,Western blot、ELISA鉴定蛋白活性,结果表明:该蛋白具有良好的抗原活性。本实验中利用原核表达的重组蛋白建立了琼脂扩散实验的检测方法。根据可溶性抗原与相应抗体混合,在电解质存在时,经过一定时间在琼脂凝胶上进行的沉淀反应,抗原、抗体结合物形成白色絮状沉淀,谓之沉淀线。可溶性抗原和抗体能在凝胶中自由扩散,二者在琼脂凝胶中相遇,在比例最适处出现肉眼可见的沉淀线(或称沉淀带),该检测方法确定了琼脂板的最佳配制比例,进行了重复性、特异性的实验,结果表明该方法具有良好的重复性、特异性,抗原应用浓度在0.91~1.83 mg/mL范围之内,可以做为检测抗原。该检测方法具有操作简便、快速、适合基层应用的优势。