Naa10p调控Pirh2-p53信号通路在口腔鳞癌侵袭转移中的作用机制研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:silas20
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目的通过研究Naa10p在OSCC中的表达以及在OSCC侵袭转移过程中发挥的作用,并阐明Naa10p通过调控Pirh2-p53信号通路影响OSCC侵袭转移分子机制。并依此为开发新型抗肿瘤转移药物提供一定的实验和理论依据,进一步提高和改善OSCC患者的治疗和预后。方法采用q RT-PCR、Western-Blot和免疫组化技术,检测Naa10p在OSCC患者肿瘤和瘤旁组织中的表达,并分析其与患者临床病理参数和预后的相关性。采用慢病毒体系,建立稳定干扰Naa10p的OSCC细胞株CAL 27以及SCC-15细胞,观察Naa10p表达变化后对细胞生长增殖、迁移、侵袭等的影响;分别将稳定干扰Naa10p的CAL 27细胞及对照组细胞接种于4-6周龄裸鼠左肋处皮下,通过裸鼠活体实验观察裸鼠注射入各组细胞后肿瘤大小、体积和重量,并绘制裸鼠的生存曲线。采用免疫组化检测OSCC患者肿瘤组织以及裸鼠成瘤组织中Naa10p、Pirh2和p53蛋白的表达并分析三者表达的相关性,以及采用Western-Blot检测CAL 27和SCC-15细胞中Naa10p对Pirh2-p53信号通路以及下游迁移侵袭蛋白MMP2、MMP9的表达调控关系。采用IP,GST-Pull Down和IF明确能与Naa10p相互作用蛋白NF-κB亚基Rel A/p65蛋白。荧光素酶报告基因实验检测Naa10p与该相互作用蛋白对Pirh2基因转录激活作用的影响。CHIP-q PCR检测Rel A/p65与Pirh2基因启动子区结合以及Naa10p对Rel A/p65结合Pirh2基因启动子区的影响。OSCC细胞运用小RNA干扰技术,分别下调Naa10p、Pirh2以及同时下调Naa10p和Pirh2后检测对OSCC细胞迁移侵袭的影响。结果1.免疫组化和q RT-PCR结果显示,OSCC组织中Naa10p的表达均显著高于癌旁组织;且其表达与患者TNM分期、淋巴结转移、分化程度以及复发之间相关。同时,Naa10p的表达与患者的OS和RFS呈正相关。2.Naa10p能够抑制OSCC细胞的迁移、侵袭、和生长增殖能力;且干扰Naa10p后促进裸鼠体内的肿瘤生长,并降低裸鼠生存期。3.Naa10p在OSCC中表达与Pirh2蛋白表达呈负相关,与p53蛋白表达呈正相关。4.OSCC细胞中Naa10p能与NF-κB的亚基Rel A/p65蛋白直接相互作用,且能抑制p65蛋白的磷酸化。5.Rel A/p65可转录激活Pirh2基因,且Naa10p能够抑制Rel A/p65转录激活Pirh2。6.截短Pirh2基因启动子区,Rel A/p65转录激活Pirh2基因启动子区S1片段的荧光素酶活性与全长Pirh2启动子相当。然而,截断体S2荧光素酶活性与对照组无显著差异,且Naa10p能够抑制Rel A/p65转录激活Pirh2基因启动子区S1片段的荧光素酶活性。7.Rel A/p65能够直接结合Pirh2基因的启动子区S1片段p65结合位点上,同时Naa10p能够抑制Rel A/p65直接结合到Pirh2基因的启动子区S1片段。8.Naa10p通过下调Pirh2的表达,抑制Pirh2对p53蛋白的降解,上调p53的表达进而抑制下游迁移侵袭相关蛋白MMP2、MMP9的表达,发挥抑制OSCC的迁移、侵袭的作用。结论1.Naa10p在OSCC中高表达,且其能够抑制OSCC细胞的迁移、侵袭,同时Naa10p可降低裸鼠体内的肿瘤生长,并延长裸鼠生存期。2.Naa10p通过调控Pirh2-p53信号通路进而抑制其下游迁移侵袭蛋白MMP2、MMP9的表达,发挥抑制OSCC迁移侵袭的作用。3.Naa10p能与NF-κB的亚基Rel A/p65直接相互作用,且抑制p65蛋白的磷酸化入核,减弱Rel A/p65结合到Pirh2基因功能启动子区S1片段激活Pirh2基因的转录。
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