【摘 要】
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目的:探究粪菌移植(Fecal microbiota transplantation,FMT)对D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭(acute fiver failure,ALF)小鼠的保护作用,并初步研究其作用机制。方法:85只雄性
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目的:探究粪菌移植(Fecal microbiota transplantation,FMT)对D-氨基半乳糖诱导的急性肝衰竭(acute fiver failure,ALF)小鼠的保护作用,并初步研究其作用机制。方法:85只雄性BALB/c小鼠随机分为6组:a正常对照组10只(CON):标准饲料喂养,不做特殊处理;b模型组15只(D-G):在饲养后2周末腹腔注射D-氨基半乳糖;c FMT治疗组15只:在饲养后2周末腹腔注射D氨基半乳糖,注射成功后当即予FMT菌液灌胃治疗(200ul/只)三天;d FMT预防14天组15只:饲养时给予FMT菌液灌胃2周(200u/只),在第二周末腹腔注射D-氨基半乳糖;e FMT预防7天组15只:饲养时给予FMT菌液灌胃1周(200ul/只),在第二周末腹腔注射D-氨基半乳糖;fFMT预防3天组15只:饲养时给予FMT菌液灌胃3天(200ul/只),在第二周末腹腔注射D-氨基半乳糖。6组均标准饲料的喂养方式,注射时皆采用3.0g/kg的D-氨基半乳糖(以生理盐水溶解,浓度为60mg/ml)的注射量,以控制变量。在各小组开始与结束时及在使用FMT干预的前后收集试验对象的粪便,利用试剂盒提取小鼠粪便DNA行16s rRNA测序。随后,收集好各组实验对象的血清、血浆及肝组织用来检测分析。具体检测项目如下:全自动生化分析仪测定血清谷氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)水平;酶联免疫吸附(Enzyme-linked-immunosorbent assay,Elisa)测定血清白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)水平;试剂盒检查血清内毒素结合蛋白(Lipopolysaccharide binding protein,LBP)水平;用电子显微镜观察HE染色肝组织病理变化。比较六组的存活率、表型观察、血清炎症因子及肠道菌群变化的结果从而进一步评价FMT对小鼠急性肝衰竭的治疗效果。结果:模型组存活率明显低于预防组及治疗组;FMT14天预防组、FMT7天预防组及治疗组的小鼠体重、肝脏重量较模型组明显增加(p<0.05):FMT14天预防组、FMT7天预防组及治疗组的小鼠肝脏组织病理损伤较模型组轻;FMT14天预防组、FMT7天预防组及治疗组的小鼠血清中抑炎因子IL-10较模型组明显增高(p<0.05),而促炎因子IL-6、LBP较模型组降低(p<0.05);FMT14天预防组、FMT7天预防组及治疗组的小鼠肠道菌群多样性较模型组增高,益生菌丰度明显增加。结论:FMT可明显提高D-氨基半乳糖诱导的ALF小鼠的生存率,缓解其急性肝衰竭程度,而具体作用机制可能与肠道菌群结构的改变有关。
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