【摘 要】
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浒苔是潮间带典型的绿藻,海带是潮下带典型褐藻。这两种海藻均有重要的经济及生态价值。全球气候变化导致海水环境变化,给浒苔和海带增加了环境胁迫的压力。因此,开展浒苔、
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浒苔是潮间带典型的绿藻,海带是潮下带典型褐藻。这两种海藻均有重要的经济及生态价值。全球气候变化导致海水环境变化,给浒苔和海带增加了环境胁迫的压力。因此,开展浒苔、海带hsp70基因的结构及功能研究,对了解大型海藻与逆境的关系,特别是研究海藻抗逆生理的机制具有重要意义。通过克隆分析获得了浒苔hsp70基因全长序列4795 bp,含有5个内含子6个外显子。推测浒苔hsp70内含子可能具有调控功能。上游调控区为1471 bp,含有多个顺式调控元件。通过荧光定量表达分析,研究了不同胁迫条件下浒苔hsp70的转录变化。结果表明在25℃处理条件下,浒苔hsp70 mRNA表达量最低。在不同盐度(0-56‰)处理中,低盐(0‰)和高盐(56‰)都引起hsp70 mRNA的大量表达。在紫外照射(0-4 h)条件下,浒苔hsp70 mRNA表达量在2.5 h达到最高。在干燥处理3 h条件下,浒苔hsp70 mRNA表达量无显著变化,3 h后mRNA表达量下降。通过构建原核表达体系,进行体外表达,得到了70 kDa重组蛋白。Western blot检测证明重组蛋白带有组蛋白标签,为浒苔HSP70的结合位点分析打下基础。获得了海带hsp70基因全长为6682 bp,含有3个内含子4个外显子,内含子中含有调控元件序列,推测其具有调控功能。上游调控区为1597 bp,含有多个顺式调控元件(如HSE、GC box、CAAT box、TATA box等),推测部分顺式元件可能参与调控了海带hsp70表达。通过体外表达和电泳检测,证明获得了72 kDa的重组蛋白,且5 h重组蛋白的表达量达到最大,之后表达量没有明显增加。
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