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目的:通过对孕大鼠腹腔巨噬细胞亚型的分析,了解孕前后不同时期感染弓形虫Chinese1型虫株对雌性大鼠巨噬细胞亚型偏移的影响;基于我国Wh3株弓形虫棒状体蛋白16的基因特异性,研究其对细胞凋亡的调控作用。方法:将SD雌性大鼠随机分为4组:空白对照组、妊娠对照组、孕前感染组和孕中感染组。其中孕前感染组在与雄鼠同笼前一天腹腔接种弓形虫速殖子,孕中感染组在孕8天接种,两组接种剂量均为含2000个速殖子的生理盐水1ml;两组对照组仅腹腔注射1ml生理盐水。于孕14天收集大鼠腹腔液,分离腹腔巨噬细胞。收集巨噬细胞上清液,检测尿素和NO含量。提取巨噬细胞蛋白,利用Western-blotting检测i NOS和Arg-1的表达水平。提取巨噬细胞RNA,用RT-PCR检测IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β和Arg-1、NO的m RNA转录水平。使用本室保存的重组真核表达载体p EGFP-ROP16转染293T细胞,并设置p EGFP空载体转染组和空白细胞组为两组对照。收集细胞,利用流式细胞术检测细胞凋亡水平。提取蛋白,利用Western-blotting检测caspase-3、caspase-9、PARP蛋白的表达。利用PCR芯片技术,检测真核细胞凋亡相关基因转录水平。结果:大鼠孕前感染组巨噬细胞的NO水平最高,且i NOS和TNF-α水平较其他3组均升高;而孕中感染组巨噬细胞的尿素产量最高,IL-10、Arg-1和TGF-β表达水平高于其他3组;妊娠对照组巨噬细胞NO水平最低。3组293T细胞的流式所测凋亡率及Western-blotting检测的caspase-3、caspase-9、PRAP蛋白表达水平均无显著差异;PCR芯片结果显示,p EGFP-ROP16转染组LTA,TNFRSF11B,BAD等促凋亡基因和抑凋亡基因BCL2A1,BAG3,BIRC5的转录水平较对照组明显升高,差异有显著性。结论:正常妊娠大鼠腹腔巨噬细胞呈现M2型偏移,孕前感染弓形虫Wh6株诱导腹腔巨噬细胞向M1型偏移;而孕中弓形虫感染不仅能诱导腹腔巨噬细胞向M1偏移,还能部分活化M2,提示孕中感染弓形虫可干扰妊娠期间的免疫耐受,导致不良妊娠结局。我国Wh3株弓形虫ROP16蛋白使293T细胞凋亡相关基因转录水平发生了变化,但在凋亡通路上并不具有连续性,且293T细胞的凋亡率未见明显变化。