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目的:1.观察不同浓度的紫杉醇对人甲状腺未分化癌细胞DRO生长的影响。2.研究紫杉醇能否阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡。3.通过测定VEGF、bcl-2及bax在紫杉醇作用前后的变化,探讨紫杉醇治疗甲状腺未分化癌的可能的分子机制。方法:1.细胞培养人甲状腺未分化癌DRO细胞株,培养于含有10%胎牛血清,1×105U/L青霉素和链霉素、0.1 mmol/L MEM非必需氨基酸、1 mmol/L丙酮酸钠的培养基中,置37℃、5%CO2培养箱培养,2~3天换液1次。用0.25%胰酶常规消化传代,取对数生长期细胞进行实验。2.细胞增殖抑制实验采用MTT法,检测经不同浓度的紫杉醇溶液(浓度分别为0、6.25、12.5、25、50、100μg/L,每个浓度设3个复孔,0μg/L紫杉醇为对照组),分别培养24、48、72小时,在酶标仪492nm波长处读取吸光度A值。存活率(%)=实验组A值/对照组A值×100%,抑制率(%)=(1-存活率)×100%。作图法得出半数抑制浓度IC50。3.细胞周期和细胞凋亡率的测定采用流式细胞仪技术,0μg/L(对照组),6.25μg/L(实验组)紫杉醇分别作用DRO细胞24、48、72小时,在FACSCalibur双激光流式细胞仪上检测细胞周期和细胞凋亡率的变化。4.采用RT-PCR方法测定经0μg/L(对照组)、6.25μg/L(实验组)紫杉醇作用48小时后DRO细胞VEGF mRNA、bcl-2mRNA及bax mRNA表达的变化。结果:1.紫杉醇对细胞生长的影响不同浓度紫杉醇与DRO细胞共同培养后,细胞生长受到抑制,并呈剂量、时间效应关系,72小时的IC50为10μg/L。2.紫杉醇对细胞周期和细胞凋亡的影响实验组紫杉醇作用于DRO细胞可将细胞周期阻滞于G2/M期,与对照组比较24小时即可检测到明显的G2/M期阻滞,48、72小时后紫杉醇G2/M期阻滞作用逐渐减退;紫杉醇能够诱导细胞凋亡,G2/M期阻滞作用后,流式细胞仪可检测到明显的凋亡峰,48小时凋亡达高峰,凋亡率为32.76%±1.54%,以后渐降低。3.VEGF mRNA、bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达变化VEGF mRNA在紫杉醇作用后表达减低,bax mRNA在紫杉醇作用后表达增强,而bcl-2 mRNA在作用前后表达无明显变化。结论:1.紫杉醇在体外具有抑制人甲状腺未分化癌DRO细胞增殖的作用,这种作用与剂量、时间呈正相关。2.紫杉醇不仅可将DRO细胞阻滞于G2/M期,还可以诱导其凋亡,低浓度紫杉醇即能显著诱导凋亡,对临床应用紫杉醇提供一定的参考价值。3.紫杉醇能够下调DRO细胞中VEGF mRNA表达水平,为紫杉醇抗甲状腺未分化癌血管生成提供一定的实验依据。bcl-2可能并不参与紫杉醇阻滞细胞周期、诱导DRO细胞凋亡的过程,而bax在此过程中可能发挥着重要的作用,可能是紫杉醇诱导细胞凋亡的重要靶基因。