论文部分内容阅读
研究背景和意义:胃癌是目前全球高发的恶性肿瘤之一。手术切除以及放化疗是治疗胃癌患者的主要手段。胃癌早期发病症状隐匿,临床上一经确诊时,往往已经是晚期和发生了转移,从而导致胃癌患者的预后较差。靶向小分子/抗体特异抑制癌基因作为一种治疗策略受到广泛关注,此策略的关键在于找到胃癌发生和转移的靶点,以作为新的药物治疗靶标。前期研究发现ACK1基因在胃癌中可能存在扩增,提示ACK1与胃癌的发生发展相关。因此,本论文着重研究ACK1在胃癌中的临床意义以及分子机制。方法与结果:1.通过分析Oncomine数据库,发现ACK1基因的DNA拷贝数和m RNA水平在胃癌组织中显著上调。2.通过分析胃癌临床样品中ACK1蛋白的表达与预后的关系,发现ACK1蛋白在胃癌组织中上调且与胃癌患者预后差密切相关。3.通过使用Transwell小室、流式细胞仪等其它方法,我们检测了沉默ACK1和过表达ACK1后对胃癌细胞增殖、克隆形成、细胞周期、细胞凋亡、EMT以及细胞迁移侵袭能力的影响。过表达ACK1促进了胃癌细胞EMT和迁移侵袭。沉默ACK1抑制了胃癌细胞增殖、克隆形成、EMT和迁移侵袭。沉默ACK1诱导胃癌细胞发生G2/M阻滞和细胞凋亡。4.采用小鼠肿瘤异种移植裸鼠模型以及体内肺转移模型,证实稳定沉默ACK1抑制胃癌细胞的裸鼠成瘤能力和肺转移能力。5.通过采用Transwell、流式细胞仪、基因干扰等其它实验方法,证实ECD在ACK1促进胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移侵袭以及EMT中发挥重要作用。6.采用双荧光报告基因分析、染色质免疫共沉淀技术、基因干扰技术以及其它方法,阐明了ACK1通过激活AKT-POU2F1-ECD通路促进胃癌发生和转移的分子机制。7.阐明了ACK1通过ECD依赖的方式促进p53蛋白泛素化降解。结论:1.ACK1基因扩增导致其蛋白在胃癌组织中上调,这一上调与胃癌临床预后差密切相关。2.证实了ACK1促进胃癌细胞增殖、克隆形成、EMT和侵袭转移的生物学功能。3.阐明了ACK1通过激活AKT-POU2F1-ECD通路,从而促进胃癌发生和转移。4.阐明了ACK1通过ECD依赖的方式促进p53蛋白的泛素化降解。