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目的近年来,越来越多的研究报道了NKD2基因在实体肿瘤中的作用及机制,但在血液疾病中,NKD2基因的表达及甲基化情况以及其对临床诊断、治疗、预后的影响还有待探索。本文拟研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)和骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)中NKD2基因的表达及甲基化水平,分析其临床意义以及对患者预后、生存的影响,为临床提供预后、疾病转归等方面的指导,为探索新的诊断标记和靶向治疗手段提供重要的线索。方法1.实时定量PCR(RQ-PCR)用于检测分析正常对照(24例)、AML患者(113例)、CML患者(71例)和MDS患者(37例)中NKD2基因的表达情况;2.实时定量甲基化特异性PCR(RQ-MSP)用于检测分析正常对照(35例)、AML患者(146例)、CML患者(82例)和MDS患者(90例)中NKD2基因的甲基化情况;3.亚硫酸氢盐测序(BSP)用于检测以上三种髓系肿瘤中NKD2的甲基化情况,并分析其与表达的相关性;4.THP-1和K562加药细胞株验证髓系肿瘤中NKD2的甲基化是否能够调控其表达。结果1 NKD2在AML中的表达及甲基化AML患者中NKD2表达水平较对照组显著下调(P=0.039)。NKD2高、低表达组患者在常见的临床、实验室参数及基因突变中并未发现统计学意义(P>0.05)。此外,全部AML、non-APL AML(AML without acute promyelocytic leukemia)以及CN-AML(Cytogenetically normal AML)患者中两组间的完全缓解(complete remission,CR)率并未发现明显差异(P>0.05)。但是,Kaplan-Meier生存分析统计发现,在CN-AML中,NKD2低表达组的总体生存(overall survival,OS)时间短于高表达组(P=0.029)。通过Cox单、多因素分析发现:NKD2低表达在CN-AML中是影响患者预后不良的独立危险因素(P=0.022)。通过GEP数据库分析两组独立的CN-AML患者群体发现:NKD2低表达患者的OS在两个群体(分别为162名和78名患者)中均短于那些NKD2高表达的患者(P=0.033,P=0.053)。此外,在随访的AML患者中发现,NKD2表达水平在诱导化疗后的CR期明显上调(P=0.024)。我们进一步检测了AML中NKD2的甲基化情况发现NKD2甲基化水平较对照组显著上调(P=0.033)。然而高、低甲基化组患者在常见临床参数中并未发现统计学差异(P>0.05)。但是在全部AML患者中发现,NKD2高甲基化组CR率低于低甲基化组(P=0.024)。在全部AML以及non-APL AML患者中,生存分析发现高甲基化组的OS明显短于低甲基化组(P=0.005,P=0.034)。Cox单、多因素分析发现NKD2高甲基化在全部AML中是影响患者预后不良的独立危险因素(P=0.006)。统计分析发现NKD2表达与其甲基化水平间存在明显的负相关(R=-0.218,P=0.029)。随后又在白血病细胞株THP-1中进行验证发现,经不同浓度的去甲基化药物5-aza-dC处理后,随着药物浓度的增加,NKD2基因的表达水平逐渐升高,而其甲基化水平呈现与表达水平相反的趋势,提示在AML中NKD2甲基化能够调控其表达。同时,我们还检测了NKD2与所在的经典Wnt/β-catenin信号通路的相关性,其中β-catenin是一种由CTNNB1基因编码的多功能蛋白,但是结果揭示CTNNB1的表达态势与NKD2的表达态势并无明显相关。2 NKD2在CML中的表达及甲基化CML患者中NKD2表达水平较对照组显著下调(P=0.002)。NKD2低表达组中的BCR-ABL1水平与高表达组并无显著差异(P>0.05)。CML中NKD2甲基化水平与对照组并无差异(P>0.05)。统计发现NKD2的表达与其甲基化水平并无明显相关性,但是K562细胞经去甲基化药物5-aza-dC处理后,随着药物浓度的增加,NKD2基因的表达水平逐渐升高,而其甲基化水平逐渐下降,提示CML中NKD2表达可能部分受其甲基化调控。3 NKD2在MDS中的表达及甲基化MDS患者NKD2表达水平较对照组显著下调(P=0.001),但是NKD2高、低表达组与常见的临床参数并未发现统计学差异(P>0.05)。生存分析也并未发现NKD2高、低表达组间患者的OS有统计学差异。并且MDS中NKD2甲基化水平与对照组并无差异(P>0.05)。但是,在临床样本中发现NKD2表达与其甲基化水平高度相关(R=-0.705,P=0.034)。结论1.NKD2基因低表达在髓系肿瘤中是常见的分子事件。2.NKD2低表达与CN-AML患者的预后不良有关,并可用于监测疾病的缓解及进展。3.NKD2在AML呈高甲基化改变,并且预示AML患者预后不良。4.在AML及MDS中,NKD2的表达可能受其甲基化调控。