BCR-ABL融合蛋白是驱动慢性髓细胞白血病（Chronic myeloid leukemia,CML）发生与疾病进展的关键因素,针对BCR-ABL融合蛋白的酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKIs）,例如伊马替尼（Imatinib,IM）,能使BCR-ABL阳性的CML患者达到有效缓解。然而,BCR-ABL继发性突变能引起获得性的TKI耐药,从而导致患者治疗失败。因此,亟需寻找新的BCR-ABL靶向治疗策略,解决TKI耐药的困境。近十年来,高通量测序的飞速发展卷起了非编码RNA（non-coding RNA,nc RNA）靶点研究的热潮。环状RNA（circular RNA,circ RNA）作为一类调控型nc RNA,稳定性高,组织与细胞特异性强,肿瘤相关基因产生的环状RNA可以调控该肿瘤的发生发展,有望成为特异性的RNA靶标。基于课题组前期测序数据及CML特异性基因分析,本课题将CRKL基因产生的环状RNA circCRKL选作研究目标,拟研究circCRKL对CML细胞恶性增殖及伊马替尼耐药发挥的作用,探索其对BCR-ABL表达的影响及分子机制。期望为CML患者带来新的靶向治疗选择。采取的主要研究方法如下:1.circCRKL的环状结构以及表达的验证。通过实时荧光定量PCR检测了circCRKL在CML患者骨髓样本,BCR-ABL阳性细胞系（K562,K562/G01,KCL22和Sup B15）与BCR-ABL阴性细胞系（THP-1和TK6）中的表达;通过核质RNA分离试验与RNA荧光原位杂交试验检测circCRKL的定位情况;通过PCR产物测序,RNase R与放线菌素D验证circCRKL的环状结构。2.circCRKL对CML细胞生物学功能的影响。通过包载了靶向circCRKL环化位点的sh RNA的慢病毒感染BCR-ABL阳性细胞（K562,K562/G01,KCL22和Sup B15）与THP-1细胞,经过嘌呤霉素筛选后获得稳定敲低细胞株;通过CCK-8,克隆形成试验检测敲低circCRKL对各细胞增殖的影响,通过流式细胞术检测其对细胞周期及凋亡的影响,同时检测敲低circCRKL对IM耐药细胞K562/G01的影响;此外,通过向NOD-SCID小鼠尾静脉注射敲低circCRKL后的K562/G01细胞,转染对照质粒的小鼠为对照组,构建CML小鼠模型,比较两组小鼠间白细胞计数,肝脾大小及重量,骨髓细胞瑞特染色和苏木素-伊红染色观察两组小鼠体内白血病细胞浸润情况;通过免疫荧光检测两组小鼠骨髓,肝脾中BCR-ABL的表达情况。3.circCRKL调控CML细胞增殖的分子机制。通过定量PCR,western blot和免疫荧光试验发现BCR-ABL受circCRKL影响。随后通过数据库预测得到mi R-877-5p是circCRKL与ABL共同的靶mi RNA。通过RNA pull-down与RIP试验证实circCRKL与mi R-877-5p之间的相互作用,双荧光素酶报告基因试验验证mi R-877-5p与ABL之间的结合。此外,分别检测了敲低与过表达mi R-877-5p对BCR-ABL以及CML细胞增殖的影响。最后,通过回复试验验证了circCRKL-mi R-877-5p-BCR-ABL轴的调控关系。取得的结果与结论如下:1.发现circCRKL在CML患者骨髓样本中高表达,特异性地在BCR-ABL阳性细胞中高表达;证实了circCRKL是一个具有稳定环状结构的,主要定位在CML细胞胞质中的环状RNA。2.敲低circCRKL能够抑制CML细胞的增殖,使S期的细胞数减少,同时可诱导细胞的凋亡,而对BCR-ABL阴性细胞THP-1的增殖无影响,而敲低circCRKL能够提高IM耐药细胞K562/G01对IM的敏感性;并能抑制CML小鼠体内的白血病细胞的增殖和浸润,降低白血病细胞内BCR-ABL的表达。3.敲低circCRKL能下调BCR-ABL的表达,随后通过回复实验证实,circCRKL影响CML增殖的机制是通过介导mi R-877-5p对BCR-ABL的调控来实现的。结论:在本研究中,起源于CML相关基因CRKL的环状RNA circCRKL,特异性地表达于BCR-ABL阳性的细胞系中。通过体外及体内实验证实circCRKL是BCR-ABL阳性细胞增殖的必要条件;此外,circCRKL能影响K562/G01细胞对IM的敏感性。机制上,circCRKL可以调控BCR-ABL的表达,而mi R-877-5p充当了该调控途径的中间介质。本课题阐明了一条环状RNA调控BCR-ABL的新机制,将为CML患者尤其是耐药患者提供一种新的治疗选择。