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血管内皮功能障碍是肺动脉高压发生过程中的重要环节，其机制主要包括内皮损伤、内皮修复失效以及血管完整性的破坏。EPCs是一群同时具有祖细胞和内皮细胞特征的细胞。EPCs来源于骨髓，在血管损伤时，EPCs被动员入血，并向血管受损部位归巢，参与血管修复。肝细胞生长因子(HGF)是一种多功能因子，具有强大的促血管形成能力，在内皮细胞上充当促有丝分裂和促形态发生因子的角色。作为一种内源性组织修复因子，HGF也具有抗细胞凋亡的作用。本研究的目的在于建立家禽EPCs分离培养方法并探索HGF对ROS损伤的肉鸡外周血EPCs功能的影响。 试验一，肉鸡外周血EPCs的分离与鉴定。采用密度梯度离心分离出肉鸡外周血单个核细胞，在EGM-2培养基中培养24-48h后去掉未贴壁细胞继续培养，培养至7d时采用FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL双染色鉴定EPCs表型，至14d时采用PCR法检测EPCs标志CD133、VEGFR-2和CD31的表达，采用MTT法检测细胞增殖，采用Matrigel实验检测体外管形成能力。结果:EPCs在培养5-7d出现，呈梭形或不定形，能同时被FITC-UEA-1和Dil-ac-LDL染色，半定量PCR和实时荧光定量PCR能检测到细胞CD133、CD31以及VEGFR-2的mRNA的表达，但检测不到CD34的表达，Matrigel实验证实细胞具有体外管形成的能力。 试验二，HGF对EPCs氧化损伤的逆转作用。取培养至12d的EPCs，加入16.5mM氧自由基(ROS)发生器2，2-偶氮（2-甲基丙基脒）二盐酸盐(2-AAPH)孵育4h后，分别加入5、10和20ng/mL HGF并继续培养24h，收集细胞，检测增殖、凋亡以及迁移能力。结果:ROS处理显著抑制EPCs增殖，诱导EPCs凋亡，并抑制EPCs的迁移。20ng/mL HGF可显著促进ROS损伤后的EPCs增殖，抑制ROS诱导的EPCs凋亡，提高ROS损伤细胞的迁移能力。 结论: 1、本研究建立起了肉鸡外周血EPCs的分离培养方法。通过细胞形态学观察、EPCs表面标志检测及体外管形成试验，证实分离到的细胞为EPCs。 2、ROS损伤可抑制EPCs增殖及迁移、诱导EPCs凋亡;一定浓度的HGF对ROS诱导的细胞损伤具有缓解作用。