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目的:1)探讨CD20+B细胞密度在晚期NSCLC患者免疫治疗中的疗效预测价值。2)探索靶向B细胞相关疗法在Lewis肺癌小鼠模型中对PD-1单抗治疗疗效的影响以及联合PD-1单抗治疗调控小鼠淋巴器官内B细胞的功能机制。3)构建B细胞相关基因对风险模型预测NSCLC患者的预后以及免疫治疗的疗效。方法:1)在TCGA数据库和GEO数据库中的NSCLC数据集中分析MS4A1（CD20 m RNA）与患者预后和免疫治疗疗效间的相关性。收集在山东第一医科大学附属肿瘤医院接受免疫治疗NSCLC患者的肿瘤组织样本,通过免疫组织化学染色评估CD20的表达水平,并收集患者的临床资料和随访,分析CD20+B细胞密度与患者免疫治疗疗效间的相关性。2)构建Lewis肺癌C57BL/6小鼠模型,通过测量肿瘤体积和记录小鼠生存时间来评估B细胞相关疗法,包括耗竭型CD20抗体和激动型CD40抗体,单药或联合PD-1单抗治疗在小鼠中的抗肿瘤效果。采用流式细胞术检测不同处理小鼠肿瘤引流淋巴结和脾组织中B细胞表面MHC-Ⅱ、CD5、CD1d、CD138、Ig D、Ig M、Ig G、CD80、PD-L2等功能和分化相关指标的表达情况。3)在TCGA数据库的NSCLC训练数据集中,基于NSCLC单细胞RNA测序数据中的B细胞亚群特异性标记基因筛选出与NSCLC患者预后相关的B细胞相关基因对,运用Lasso-Cox比例风险模型构建B细胞相关基因对预后风险模型,通过ROC曲线确定该模型风险评分的最佳截断值,进一步将NSCLC患者分为高风险和低风险亚组,并且使用Kaplan-Meier法及Log-rank检验分析训练数据集和验证数据集中高、低风险亚组患者的生存状态。运用卡方检验及Wilcoxn检验分析NSCLC患者的临床病理特征与该模型的相关性,应用ESTIMATE以及CIBERSORT算法明确NSCLC肿瘤微环境免疫评分、基质评分、肿瘤纯度以及22种免疫细胞的浸润情况。此外,基于GSEA和ss GSEA方法对该模型进行功能注释及分析。最后,评估该模型的风险评分与CD274（PD-L1 m RNA）表达、TMB评分之间的相关性,并基于TIDE算法预测NSCLC患者免疫治疗的疗效。结果:1)NSCLC肿瘤组织中MS4A1的表达明显高于癌旁正常组织（P＜0.05）;MS4A1表达与NSCLC患者的临床分期呈负相关,差异具有统计学意义（P＜0.05）;MS4A1高表达NSCLC患者的OS相比MS4A1低表达患者明显延长,差异具有统计学意义（P=0.014）;接受免疫检查点抑制剂治疗且MS4A1高表达的NSCLC患者,PFS相比MS4A1低表达患者有延长的趋势,但未达到统计学差异（P＞0.05）。接受免疫检查点抑制剂治疗的晚期NSCLC患者,肿瘤浸润性CD20+B细胞的密度与患者的ORR和DCR无明显相关性（P＞0.05）;肿瘤浸润性CD20+B细胞高表达NSCLC患者的OS相比CD20+B细胞低表达患者显著延长（P=0.025）,PFS有延长的趋势,但未达到统计学差异（P＞0.05）。2)体内注射耗竭型CD20抗体能有效消除Lewis肺癌小鼠血液、淋巴结、脾脏以及肿瘤组织中的B细胞,且持续时间大于20天;在Lewis肺癌小鼠模型中,耗竭小鼠体内B细胞抑制了PD-1单抗的疗效,肿瘤生长显著增加;激动型CD40抗体能够促进Lewis肺癌小鼠瘤内B细胞簇的形成和浸润,增加了PD-1单抗的疗效,二者联合治疗明显抑制肿瘤的生长,显著延长小鼠的生存时间（对照组、PD-1单抗组、激动型CD40抗体组、联合治疗组小鼠的中位生存时间分别为26天、28天、28天、40天）;激动型CD40抗体联合PD-1单抗治疗能显著改善B细胞上MHC-Ⅱ类分子的表达,促进记忆B细胞亚型及浆细胞的形成,从而发挥协同抗肿瘤的作用;耗竭B细胞后,激动型CD40抗体联合PD-1单抗治疗的抗肿瘤功能受到抑制,Lewis肺癌小鼠长期存活率明显降低。3)在NSCLC患者中成功构建由23个B细胞相关基因对组成的B细胞相关基因对风险模型;在训练数据集和验证数据集中,低风险NSCLC患者的OS均显著优于高风险组的患者（P＜0.001,P=0.001）;Cox分析证实,模型风险评分是影响NSCLC患者预后的独立因素;该模型的风险评分与NSCLC患者的肿瘤TNM分期明显相关,高风险患者临床分期相对更差;TME分析显示,低风险组NSCLC患者的ESTIMATE评分、免疫评分、基质评分明显更高（P值均＜0.05）,而肿瘤纯度更低（P＜0.05）;免疫细胞分析表明,CD8+T细胞、静息肥大细胞、浆细胞、静息树突状细胞、记忆B细胞、调节性T细胞和γδT细胞在低风险组患者中的含量更高（P值均＜0.05）;GSEA结果证实,免疫激活相关通路在低风险组患者中显著富集;此外,CD274在高、低风险NSCLC患者间的表达水平无显著差异（P=0.940）,但高风险组NSCLC患者的TMB评分明显高于低风险组患者（P＜0.001）;与低风险组NSCLC患者相比,高风险组患者的TIDE评分显著降低（P＜0.01）,更有可能从免疫治疗中获益。结论:1)肿瘤浸润性CD20+B细胞的密度与晚期NSCLC患者免疫治疗疗效相关,CD20高表达NSCLC患者接受免疫治疗后的OS更优,CD20可作为预测NSCLC患者免疫治疗疗效的潜在标志物。2)耗竭小鼠体内B细胞能显著促进Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长,而激动型CD40抗体能增加PD-1单抗的疗效,二者联合治疗通过改善B细胞的功能具有协同抗肿瘤的作用,在NSCLC治疗中有着广阔的应用前景。3)B细胞相关基因对风险模型能指导NSCLC患者的预后分层,并与患者的临床分期、TME和TMB评分显著相关,该模型的建立可作为预测NSCLC患者预后及免疫治疗疗效的标志物。