巨玫葡萄茎尖脱毒体系的建立及CBFs基因的克隆

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“巨玫”葡萄是利用人工诱变的四倍体玫瑰香与巨峰杂交选育获得的优质葡萄新品种,其不仅具有玫瑰香的独特香味,还继承了巨峰品种的环境适应能力。由于其皮薄多汁,甜香爽口,带有浓郁的玫瑰香气,深受消费者喜爱,种植面积也逐年增加。但在葡萄生产过程中,葡萄扇叶病毒病、卷叶病毒病和冬季严寒,是危害葡萄产量和品质的主要因素,且难以通过化学药物手段防治,本研究的目的是通过组织培养的方法,对“巨玫”进行病毒病脱除。利用不同类型外植体探究消毒剂类型、基本培养基类型及激素种类和浓度等在快速繁殖过程中的作用,比较不同取样时间对外植体繁殖的影响。克隆不同品种调控葡萄抗寒性相关基因的CBF基因,经过多品种多序列比对,分析不同品种抗寒性差异及序列差异,并利用实时定量分析不同CBF基因在不同品种中的表达差异,揭示其在葡萄耐寒性中的调控作用,为提高葡萄的耐寒性提供参考。研究结论如下:  1、田间植株扇叶病卷叶病的带病率分别为54%、36%,混合感染植株为20%,经茎尖愈伤组织培养脱毒后,无菌苗检测葡萄卷叶病和扇叶病侵染率为0%,完全脱除。  2、利用茎尖带芽茎段等外植体,建立了“巨玫”葡萄快速繁殖体系,确定了不定芽增殖最佳培养基为C2D+6BA1.1 mg/L+KT0.5 mg/L,适宜生根的培养基和激素组合为1/2MS+NAA0.30 mg/L、1/2MS+IAA0.50 mg/L和1/2MS+IBA0.10 mg/L。  3、成功从夏黑、超峰、山葡萄等6种葡萄中克隆得到了CBF1、CBF2、CBF3基因。抗寒性不同的品种之间在CBF系列基因的核苷酸水平存在差异。  4、CBF2序列多重比较结果显示,超峰,夏黑该基因核苷酸序列与其他品种不同,翻译得到的蛋白分子部分疏水性改变且不同于山葡萄、“巨玫”等其他品种。  5、实时定量结果显示,在抗寒性不同的巨玫和山葡萄中,低温胁迫能诱导CBF2和CBF3的表达,同时期CBF2的表达量高于CBF3基因。
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