[目的] 1、探讨内皮抑素(ES)基因对骨肉瘤血管生成的作用; 2、探讨内皮抑素基因对骨肉瘤生长和转移的影响。[方法] 1、pBudCE4.1/ES重组质粒在体外扩增、抽提并酶切和测序鉴定; 2、体外培养骨肉瘤细胞株UM106细胞,应用脂质体法进行ES基因转染,Zeocin抗性筛选获得阳性细胞克隆(ES-UMR106细胞),以未转染UM106细胞为对照,MTT法绘制生长曲线,观察ES基因对UM106细胞增殖能力的影响; 3、应用ELISA法检测阳性细胞克隆的ES分泌情况; 4、取ES-UMR106细胞培养液上清,用于血管内皮细胞体外培养,观察其对血管内皮细胞体外增殖能力的影响以评估ES体外活性; 5分别应用ES-UMR106细胞和UMR106细胞制作裸鼠皮下肿瘤模型,观察两组动物的肿瘤生长、侵袭和转移情况; 6、分别应用ES-UMR106细胞和UMR106细胞尾静脉注射制作裸鼠肺转移肿瘤模型,观察两组动物肺转移灶形成、数量和大小。[结果] 1、在体外扩增pBudCE4.1/ES重组质粒,酶切和测序鉴定为阳性重组子; 2、对骨肉瘤UMR106细胞进行成功转染,可稳定表达有生物活性的ES,对体外培养的血管内皮细胞增殖具有抑制作用; 3、ES在体内可以抑制皮下肿瘤的生长,但没有降低动物的皮下成瘤率; 4、ES在体内可抑制UM106细胞株肺转移灶的形成和生长。[结论] 1、应用ES重组质粒可成功转染骨肉瘤ES-UMR106细胞,转染后ES-UMR106细胞可有效表达目的基因; 2、表达的ES蛋白可达到有效浓度,并具有生物学活性,在体外可有效抑制血管内皮细胞增殖; 3、动物体内实验表明内皮抑素对骨肉瘤的生长和转移均有抑制作用,可作为骨肉瘤综合治疗的组成部分。