目的:　　 Oddi括约肌功能障碍(sphincter of Oddi dysfunction，SOD)是指由于Oddi括约肌(sphincter of Oddi，SO)运动异常导致的胆汁、胰液排出受阻，胆管、胰管内压升高，继而出现胆汁淤积、胰源性腹痛或急性胰腺炎等临床症状的一种疾病。动物实验研究发现，高胆固醇血症(hypercholesterolemia，HC)可导致兔SO压力增高、舒张功能受损，与SOD时SO运动的改变相似，提示高胆固醇血症可能是原发性SOD的重要诱因。进一步研究表明，高胆固醇血症诱发SOD功能异常主要与细胞内钙离子浓度(intracellular calcium concentration，[Ca2+]i)超载密切相关。　　 平滑肌细胞膜(smooth muscle cells，SMCs)存在多种钾离子通道，其在维持细胞膜静息电位方面起到重要作用。其中，电压依赖性钾离子通道(voltage-dependentpotassium channel，Kv)和大电导钙激活型钾离子通道(large conductancecalcium-activated potassium channel，BKca)在数量上占据绝对优势，其作为L型电压依赖性钙离子通道（L-type voltage-dependent calcium channel，L-VDCC）的重要上游调控通道，对L-VDCC的功能状态起到重要影响，进而影响[Ca2+]i，调节平滑肌张力变化。　　 既往研究表明，一氧化氮(nitric oxide,NO)供体单硝酸异山梨酯有舒张兔Oddi括约肌的作用，免疫组织化学研究发现NO合成酶在哺乳动物及人的SO组织中广泛存在，其功能对于SO运动功能起到显著影响，这表明NO可能在调节Oddi括约肌功能方面起到重要作用，但其具体机制尚不明确。　　 本实验以此为切入点，通过饲喂高胆固醇饮食建立高胆固醇血症兔模型模拟SOD状态，采用等长张力记录的方法观察外源性NO供体硝普钠(sodiumnitroprusside，SNP)对不同钾离子通道阻滞剂预处理的SO肌环的舒张作用，通过蛋白免疫印迹法(Western blot)及反转录-聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction，RT-PCR)技术观察通道蛋白表达的变化，并通过酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测SO平滑肌的磷酸激酶C(phosphate kinase C，PKC)活性，初步探讨NO在调控Oddi括约肌运动方面的可能机制。　　 实验方法:　　 一、硝普钠对高胆固醇血症兔Oddi括约肌张力及钾离子通道的影响　　 将24只新西兰大白兔随机分为对照组(CON)、4-氨基吡啶(4-aminopyridine，4-AP)实验组及盐酸四乙胺(tetraethylammonium，TEA)实验组，给予高胆固醇饮食饲喂8周，通过等长张力记录方法，观察SO肌环对钾离子通道阻滞剂4-AP和TEA的收缩反应，并观察比较SNP对各组SO肌环的舒张作用。　　 二、硝普钠对高胆固醇血症对兔Oddi括约肌Kv1.5及BKca通道蛋白及PKC活性的影响　　 将新西兰大白兔16只采用完全随机分组方法，分为对照组(CON)、对照组+NO(CON+NO)，高胆固醇血症组(CH)、高胆固醇血症+NO(CH+NO)组共4组，给予后两组高胆固醇饮食饲喂8周，对照组给予普通饮食，成功建立模型后，给予CON+NO组和CH+NO组兔腹腔注射硝普钠5mg/Kg，隔天再给药一次，24h后分别取相应组别Oddi括约肌组织。通过HE染色观察各组组织形态学变化，通过Western Blot及RT-PCR实验观察各组Kv1.5及BKca通道蛋白的表达，并通过Elisa实验观察各组PKC活性变化。　　 实验结果:　　 一、动物模型构建情况　　 饲喂高胆固醇饮食的新西兰兔饲喂8周后，各组血清总胆固醇均大于10mmol/L，成功建立高胆固醇血症模型。　　 二、硝普钠对高胆固醇血症兔Oddi括约肌张力及钾离子通道的影响　　 SO肌环初始收缩平均波幅为（0.144±0.004）g，平均收缩频率为（10.8±1.1）次/min。累积浓度4-AP对SO肌环有收缩作用，收缩频率较对照组减低(p＜0.05)，以16mmol/L为终浓度的4-AP组肌环对SNP舒张作用明显低于对照组(p＜0.05)。累积浓度TEA也可明显收缩SO肌环，收缩作用较对照组明显增大，收缩频率较对照组减低(p＜0.05)。以10mmol/L为终浓度的TEA组肌环对SNP舒张作用同样低于对照组(p＜0.05)。　　 三、硝普钠及高胆固醇血症对SO平滑肌组织学影响的光镜下观察　　 通过对各组组织的HE染色，在200倍光镜下观察可见各组SO肌排列整齐，均无明显炎细胞浸润及纤维组织增生，组织形态上无明显异常。　　 四、硝普钠及高胆固醇血症对兔Oddi括约肌Kv1.5及BKca通道蛋白的影响　　 高胆固醇血症有导致SO平滑肌Kv1.5及BKca通道蛋白表达水平及mRNA表达水平降低的趋势。NO有使SO平滑肌Kv1.5及BKca通道蛋白表达水平及mRNA表达水平升高的趋势。　　 五、硝普钠及高胆固醇血症对兔Oddi括约肌PKC活性的影响　　 高胆固醇血症可致SO蛋白磷酸化水平增高，NO有使PKC活性下降趋势，其在CH组作用更明显。　　 结论:　　 1、外源性NO供体SNP可能部分通过Kv及BKca通道发挥舒张SO肌环的作用。　　 2、HC可导致SO平滑肌Kv1.5及BKca通道蛋白表达水平及mRNA表达水平降低，NO可提高SO平滑肌Kv1.5及BKca通道蛋白及mRNA表达水平，这可能是NO舒张SO肌环的机制之一，这对于NO供体药物治疗SOD靶点提供了新的依据。　　 3、HC可使SO蛋白PKC活性增高，既往研究表明PKC有抑制Kv及BKca通道活性作用，NO有使PKC活性下降的趋势，这可能是NO供体药物治疗SOD的另一可能机制。