目的:利用慢病毒介导RNAi技术,构建PARK2长时间沉默的神经细胞,研究锰在不同浓度,相同时间条件下对PARK2作用的影响。为后期研究PARK2锰致神经毒性效应机制打基础。方法:设计PARK2基因sh RNA靶点,用p GMLV-SC1 RNAi慢病毒载体,构建了4对sh RNA慢病毒干扰载体,4对sh RNA慢病毒干扰载体分别感染纹状体神经细胞,采用蛋白印迹法(Western Blot)和实时荧光定量(Real Time PCR)方法验证沉默效果。用单纯慢病毒组和慢病毒RNAi组感染大鼠纹状体神经细胞分别以0、100、300、500μmol/L浓度染锰24h,用Real Time PCR和Western Blot分别检测PARK2基因m RNA和蛋白表达水平的变化。结果:通过酶切以及测序证明4对慢病毒干扰载体构建成功,分别感染大鼠纹状体神经细胞后可观察到GFP荧光表达。经Western Blot与Real Time PCR验证:PARK2表达产物蛋白及m RNA表达较空白组与阴性对组显著下降(P<0.01);4对sh RNA均有一定的沉默效果,其中PARK2sh RNA4沉默效果最明显,抑制率>81%;而空白组与阴性对照比较(P>0.05)无统计学意义。Real Time PCR和Western Blot结果显示:单纯慢病毒染锰组:与对照组比较,300μmol/L和500μmol/L在锰24h作用下,PARK2m RNA及蛋白表达下降(P<0.01)。慢病毒RNAi组:与对照组比较,100μmol/L-500μmol/L在锰24h作用下PARK2m RNA及蛋白表达下降(P<0.01、P<0.05)。结论:成功构建慢病毒载体PARK2sh RNA表达,有效的降低了大鼠纹状体神经细胞PARK2m RNA和其表达产物蛋白,使其PARK2基因沉默。锰暴露24h作用下PARK2m RNA和蛋白表达下降更显著。