研究背景:肾细胞癌简称肾癌,是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,它的发病率很高,且近年来呈现出逐年增长的趋势,因为对其发生发展的分子机制的研究并不十分清楚,给它的早期诊断以及治疗带来了很多困扰。神经元衍生的神经营养因子(NDNF)基因,又名C4orf31。目前的研究发现其在神经系统中分布广泛,起着营养支持神经元的作用,它还能维持内皮细胞生存和血管形成,有利于血管的重建。我们课题组通过前期的转录组测序工作发现NDNF在肾癌中低表达,但是,NDNF与肾癌发生发展的关系到底如何,目前尚无相关研究报道进行说明,因此,本研究主要针对NDNF在肾癌中的表达以及一些生物学功能进行了初步的研究。研究目的:1、检测NDNF在肾癌组织及肾癌细胞系中的表达;2、了解NDNF对肾癌细胞ACHN和786-0增殖、迁移以及侵袭能力的影响;3、检测 NDNF 对肾癌细胞 ACHN 和 786-0 中 EMT 标记物 E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,初步探索NDNF影响肾癌细胞转移的分子机制。研究方法:首先,收集未经放化疗的69例临床手术切除的肾癌组织及相应的癌旁正常组织,采用RT-qPCR和Western blot检测NDNF在肾癌组织及相应的癌旁正常组织中的mRNA和蛋白表达水平;其次,采用相同的实验方法检测NDNF在肾癌细胞系ACHN、OS-RC-2、786-0和769-P中的表达情况;然后,构建NDNF稳定表达的重组慢病毒表达细胞模型,采用CCK-8法和细胞平板克隆形成实验评估肾癌细胞的增殖能力;Transwell细胞迁移和侵袭实验检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力;最后,采用Western blot检测EMT标记物E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白在肾癌细胞中的表达水平,初步探索NDNF影响肾癌细胞迁移的分子机制。实验数据均采用SPSS22.0统计软件进行数据分析处理,所有实验都重复至少3次以上,实验结果数据用平均值±标准差(mean±S.D.)表示。实验结果的比较采用Independent sample t-test检验。P<0.05表示差异具有显著的统计学意义。研究结果:1、NDNF在肾癌组织和肾癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平均下调;2、肾癌细胞ACHN和786-0转染过表达病毒后,NDNF的蛋白表达水平明显高于相应的阴性对照组细胞;3、NDNF抑制肾癌细胞增殖:CCK8细胞增殖试验中,肾癌细胞ACHN和786-0的NDNF过表达组的细胞生长曲线均明显低于相应的阴性对照组(P<0.05)。细胞平板克隆形成实验中,ACHN细胞的NDNF过表达组细胞克隆数为89,阴性对照组为265,克隆形成率分别为9.8%、36.4% (P<0.05) ; 786-0细胞的NDNF过表达组细胞克隆数为115,阴性对照组为158,克隆形成率分别为16.4%、22.7% (P<0.05),即NDNF抑制了肾癌细胞ACHN和786-0的细胞增殖能力;4、NDNF抑制肾癌细胞迁移:NDNF过表达组的肾癌细胞穿过Transwell小室至其下侧的细胞数量显著少于阴性对照组的肾癌细胞。33%醋酸洗脱小室下侧的细胞后测其平均吸光值,ACHN细胞株:0.55 (NDNF过表达组)、1.00 (阴性对照组)(P<0.05) ; 786-0细胞株:0.68 (NDNF过表达组)、1.00 (阴性对照组)(P<0.05)。即NDNF抑制了肾癌细胞ACHN和786-0的细胞迁移能力;5、NDNF抑制肾癌细胞侵袭:NDNF过表达组的肾癌细胞穿过Transwell小室至其下侧的细胞数量显著少于阴性对照组肾癌细胞。33%醋酸洗脱小室下侧的细胞后测其平均吸光值,ACHN细胞株:0.47 (NDNF过表达组)、1.00 (阴性对照组)(P<0.05) ; 786-0细胞株:0.71 (NDNF过表达组)、1.00 (阴性对照组)(P<0.05)。即NDNF抑制了肾癌细胞ACHN和786-0的细胞侵袭能力;6、在肾癌细胞ACHN和786-0中,NDNF过表达组中的EMT的间质表型标记物N-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平相较于阴性对照组均显著下调,但是上皮表型标记物E-cadherin的蛋白表达水平显著上调。研究结论:NDNF在肾癌组织及肾癌细胞系中的表达下调;NDNF抑制肾癌细胞ACHN和786-0的增殖、迁移以及侵袭能力;NDNF下调肾癌细胞ACHN和786-0中N-cadherin和Vimentin蛋白的表达水平并上调E-cadherin蛋白的表达水平,这提示我们NDNF可能是通过EMT相关的通路来抑制肾癌细胞的迁移侵袭能力的。