男性不育症是当今全球生殖医学领域研究的热点与难点,而少、弱精子症是导致男性不育的重要原因。作为临床治疗少、弱精子症的常用药——黄精赞育胶囊的作用机制受到了人们的关注。前期实验发现,五味子甲素是黄精赞育胶囊体内重要入血成分,并对睾丸间质细胞增殖具有促进作用。本研究拟从凋亡通路入手,通过动物实验探究五味子甲素对少、弱精子症的作用机制。论文分为文献综述、理论探讨和实验研究三大部分。文献综述系统总结了现代医学对男性不育症的研究进展,从男性不育症的发病机制与西医临床治疗两方面进行概述,探讨了当前生殖医学的研究现状与趋势;梳理了中医对男性不育症研究的历史沿革,并从基础与临床两方面探讨了中医药在男性不育症的应用情况以及文献、实验、流行病学范畴的研究。理论探讨部分从模型、机制、药物三个方面展开探讨,介绍了本次实验造模方案、切入点以及实验用药的选择理由。实验研究共分为4个部分。目的:1.通过五味子甲素对少、弱精子症大鼠模型进行干预,观察其各项精液参数、组织形态以及性激素的变化,明确五味子甲素改善少、弱精子症模型的作用效果。2.通过分子生物学实验技术,探究五味子甲素干预后SCF/c-kit通路凋亡相关因子表达水平的变化。3.结合五味子甲素对形态学及分子层面上的改变,验证其抑制生精细胞凋亡的作用机制,为进一步揭示五味子甲素改善少、弱精子症大鼠作用原理提供思路。方法:选用雷公藤多苷(GTW)对80只雄性SD大鼠制造少、弱精子症模型,选择左卡尼汀、黄精赞育胶囊作为阳性对照药,造模与给药各35天。实验结束后,使用精子质量检测系统检测大鼠各项精液指标变化。运用免疫酶联检测法(ELISA),检测血清中睾酮(T)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)水平。通过光学显微镜观察睾丸组织病理结构变化,并运用电子显微镜观察微观结构。通过免疫组化、Western Blot方法检测凋亡相关因子SCF、c-kit、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平,并通过Real-time PCR的方法检测其mRNA表达水平。所有实验数据统一使用SPSS 20.0软件进行数据统计。结果:1.造模后,GTW组大鼠精液各项参数均出现显著下降,给药组精子数量与质量均有变化,其中五味子甲素高剂量组对精子密度、精子活动率改善显著(P<0.05)。2.血清性激素方面,GTW组导致大鼠下丘脑-垂体-性腺轴功能紊乱,血清T、E2含量下降,LH含量升高。五味子甲素可提高T水平,调整LH、E2水平,其中五味子甲素低剂量组的LH水平显著降低(P<0.05)。3.镜下观察可见GTW组大鼠生精小管变形塌陷,生精细胞脱落及消失,Sertoli细胞萎缩;五味子甲素高剂量组生精小管结构良好,各级生精细胞规则排列,形态完整,Sertoli细胞形态基本正常。微观结构方面,GTW组大鼠出现线粒体肿胀及空泡化,胞质自噬体异常增多;给药各组较GTW组细胞器形态上略有恢复。4.分子生物实验结果显示,GTW可下调抗凋亡因子SCF、Bcl-2蛋白及mRNA的表达,显著上调促凋亡因子Caspase-3蛋白及mRNA的表达(P<0.05)。五味子甲素高剂量组显著上调SCF蛋白及mRNA表达水平(P<0.05),显著下调Caspase-3蛋白与mRNA水平(P<0.05)。各组大鼠c-kit蛋白表达量均较大,五味子甲素中剂量组可降低睾丸组织c-kit含量。结论:少、弱精子症可通过对睾丸组织形态学的改变、内分泌紊乱、促凋亡基因的过表达以及抗凋亡基因的抑制致使精子数量减少、质量下降,最终导致男性不育的发生。五味子甲素可通过恢复生精小管的形态及功能,改善睾丸内环境,上调抗凋亡基因SCF表达以抑制SCF/c-kit信号通路产生的异常凋亡,从而达到生精的目的,是黄精赞育胶囊治疗少、弱精子症的有效成分之一。SCF/c-kit信号通路在调控生精细胞凋亡的同时也调控细胞增殖分化,我们推测五味子甲素可能干预了 SCF/c-kit通路对生精细胞增殖的调控过程。