目的 对市售小活络(大蜜)丸和自制的小活络丸传统剂型水丸、小蜜丸、水蜜丸、大蜜丸、糊丸,以及近代常用的浓缩丸等进行释放动力学特征研究,以评价不同类型小活络丸的释药特征,并根据其释药特征对小活络丸进行释药系统的重构,制备小活络缓释滴丸,为有毒中药口服缓控释制剂的研究提供示范。方法 1.制备小活络丸水丸、小蜜丸、水蜜丸、大蜜丸、糊丸等丸剂类型,并按照2010版《中国药典》中的规定进行质量检查。采用紫外分光光度法测定市售小活络(大蜜)丸与自制不同类型小活络丸的物质组释放度。以物质组释放度为指标,考察市售小活络丸在不同pH的释放介质中的释放情况,评价小活络丸的质量及其释放动力学特征。2.采用HPLC方法测定小活络丸溶出液中苯甲酰新乌头原碱的释药量,以苯甲酰新乌头原碱的释药量为指标,考察不同类型小活络丸的在不同pH的释放介质中的释药特征,并对小活络丸的物质组释放度与苯甲酰新乌头原碱释放度进行相关性研究,以考察小活络丸释放度评价方法的科学性和合理性。3.采用HPLC方法测定小活络复方药粉中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱的含量。采用单因素和正交设计的方法,以总乌头类生物碱的提取率为指标,考察小活络丸的提取工艺的影响因素,对小活络丸提取工艺进行优化。4.以优化的提取工艺制备小活络(浓缩)丸,并对其进行质量检查。以物质组释放度为指标,评价小活络(浓缩)丸的释放动力学特征和机制。以滴丸的圆整度、拖尾度、粘连度、硬度和物质组释放度为指标,采用单因素考察的方法,对小活络缓释滴丸的处方工艺进行筛选和优化。以滴丸外观形态为指标,采用正交设计的方法,对小活络缓释滴丸进行成型性研究,优化小活络缓释滴丸的制备工艺参数。以物质组释放度和苯甲酰新乌头原碱释放度为指标,考察小活络缓释滴丸的体外释放度情况,并探讨该制剂的释药机制。结果 1.制备了水丸、小蜜丸、水蜜丸、大蜜丸和糊丸等类型的小活络丸,其质量检查项重量差异限度分别为:1.403g±2.20%、2.796g±1.68%、3.096g±1.97%、2.907g±3.78%、1.637g± 1.47%;含水量分别为 4.09%、10.01%、11.71%、12.99%、5.73%;溶散时间分别为:59.67、44.00、51.17、112.00、38.50min;均符合规定。建立了以UV测定小活络丸在4种不同pH释放介质中物质组释放度的分析方法,该方法在0.114-1.137mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。以蒸馏水为介质的线性回归方程中r值为0.9996;低、中、高浓度供试液精密度考察的RSD值分别为1.42%、0.30%、0.12%;以其低、中、高浓度供试液稳定性考察的RSD值分别为2.50%、1.37%、1.05%;pH1盐酸溶液为介质的线性回归方程中r值为0.9990;低、中、高浓度供试液精密度考察的RSD值分别为2.56%、1.69%、0.06%;以其低、中、高浓度供试液稳定性考察的RSD值分别为2.06%、1.89%、2.24%;pH4.5醋酸-醋酸铵缓冲液为介质的线性回归方程中r值为0.9994;低、中、高浓度供试液精密度考察的RSD值分别为2.53%、1.52%、0.08%;以其低、中、高浓度供试液稳定性考察的RSD值分别为2.20%、1.79%、0.09%;pH6.8磷酸盐缓冲液为介质的线性回归方程中r值为0.9990;低、中、高浓度供试液精密度考察的RSD值分别为2.04%、0.29%、0.43%;以其低、中、高浓度供试液稳定性考察的RSD值分别为2.47%、2.14%、1.94%。表明该方法准确、可行。市售3个厂家的小活络(大蜜)丸在4种释放介质中12h内的物质组累积释放度分别为甲厂:蒸馏水中92.38%,pH 1盐酸溶液中84.34%,pH 4.5醋酸-醋酸铵缓冲液中81.74%,pH 6.8磷酸盐缓冲液中85.39%;乙厂:蒸馏水中94.12%,pH 1盐酸溶液中83.93%,pH 4.5醋酸-醋酸铵缓冲液中85.14%,pH 6.8磷酸盐缓冲液中92.63%;丙厂:蒸馏水中82.98%,pH 1盐酸溶液中86.66%,pH 4.5醋酸-醋酸铵缓冲液中87.27%,pH 6.8磷酸盐缓冲液中79.66%;释药较不完全。市售3个厂家小活络(大蜜)丸在各个厂家之间的释放度参数T50、Td小于0.05,同一厂家同一批号的小活络丸大蜜丸释放度参数T50、Td的方差分析结果P小于0.05。其释放度曲线与数学模型拟合结果为:甲厂基本符合Peppas模型与一级模型;乙厂基本符合一级模型和Weibull模型;丙厂基本符合Weibull模型和零级模型。水丸、小蜜丸、水蜜丸、大蜜丸及糊丸,以蒸馏水为介质的12h累积释放度分别为93.13%、96.39%、93.03%、93.99%、95.33%;以 pH1 盐酸溶液为介质的 12h 累积释放度分别为93.79%、93.09%、91.13%、96.77%、90.64%:以pH4.5醋酸-醋酸铵缓冲液为介质的 12h 累积释放度分别为 93.32%、90.85%、91.26%、95.74%、88.57%;以 pH6.8磷酸盐缓冲液为介质的12h累积释放度分别为82.46%、92.73%、90.85%、94.17%、92.02%,基本能够在12h内释放较完全。同种类型的小活络丸在不同介质中释放参数T50、Td方差分析结果P小于0.05。2.建立了以HPLC测定小活络丸溶出液中苯甲酰新乌头原碱释药量的方法,在0.0033-0.1320mg·mL-1浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);其精密度RSD值为0.65%;以蒸馏水、pH1盐酸溶液、pH4.5醋酸-醋酸铵缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液中稳定性结果RSD值分别为2.15%、2.24%、2.67%、2.52%;重复性结果RSD值为0.49%;加样回收试验结果平均回收率为101.41%,RSD值为1.10%。表明该方法准确、可行。不同类型小活络丸中苯甲酰新乌头原碱在12h内释药量有明显差异(T50、Td方差分析结果P小于0.05),水丸、小蜜丸、水蜜丸、大蜜丸及糊丸中的苯甲酰新乌头原碱,以蒸馏水为介质的12h累积释药量分别为93.22%、91.30%、96.49%、94.89%、91.19%;以pH1盐酸溶液为介质的12h累积释放度分别为94.74%、96.57%、92.18%、96.77%、91.16%;以pH4.5醋酸-醋酸铵缓冲液为介质的12h累积释放度分别为94.74%、93.56%、94.75%、83.31%、85.94%;以pH6.8磷酸盐缓冲液为介质的12h累积释放度分别为87.51%、91.05%、92.25%、89.77%、85.34%。5种类型的小活络丸释放度较符合Weibull模型。小活络丸在4种介质中苯甲酰新乌头原碱释放度与物质组释放度相关系数均大于0.9,且相关性的显著性检验结果P<0.01。3.建立了 HPLC测定小活络丸复方药粉中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱含量的方法,各生物碱对照品分别在0.065-0.910μg、0.052-0.728μg、0.050-0.700μg、0.021-0.294μg 范围内呈良好的线性关系(r=0.9999、0.9999、0.9999、0.9997);精密度结果 RSD 值分别为 1.06%、0.91%、0.87%、0.86%;稳定性结果RSD值分别为0.80%、1.43%、2.28%、2.70%;加样回收试验结果平均回收率分别为 98.26%、96.36%、101.88%、95.84%,RSD 值分别为 1.23%、0.75%、2.11%、0.63%。该方法准确,可行。小活络丸复方细粉总乌头类生物碱含量为0.0512%。优化的小活络丸提取工艺参数为:以10倍量的溶剂量,以60%乙醇溶液在85℃下加热回流提取2次,每次2h。工艺验证试验结果总乌头类生物碱的转移率达91%,浸膏得率约为13%,小活络丸干浸膏中总乌头类生物碱含量达0.4036%,表明该工艺稳定可行,重现性良好。4.建立了 UV测定小活络缓释滴丸物质组释放度的方法,在0.109-1.091mg·mL-1浓度范围内线性关系良好(r=0.9996),其低、中、高浓度供试液的精密度结果RSD值分别为:0.14%、0.04%、0.05%;低、中、高浓度供试液的稳定性结果RSD值分别为:2.84%、2.54%、2.49%。该方法稳定、可行。建立了 HPLC测定小活络缓释滴丸中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱含量的方法,各生物碱对照品分别在 0.065-0.910μg、0.052-0.728μg、0.050-0.700μg、0.021-0.294μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999、0.9999、0.9999、0.9997),精密度结果RSD值分别为:0.81%、1.26%、1.16%、2.39%;稳定性结果 RSD 值分别为:1.35%、2.52%、2.23%、1.97%;重复性结果RSD值分别为:2.95%、2.66%、2.50%、2.51%;加样回收结果平均回收率分别为:96.59%、98.82%、97.74%、101.46%,RSD 值分别为:1.07%、1.75%、1.77%、2.65%。该方法稳定、可行。以优化的工艺提取小活络丸提取液所制备的浓缩丸中,有效成分含量有所提高(总乌头类生物碱含量为0.0506%),浓缩丸表现出一定的缓释特征,但其释放速率仍较快,存在突释的危险。确定的小活络缓释滴丸处方为:主药(小活络方干浸膏)与基质比例为1:4,基质为PEG6000与硬脂酸1:1.5,以液体石蜡为冷凝液,冷凝温度6-8℃;确定的滴丸制备工艺参数为:滴制温度75℃,滴距3cm,滴速40滴/min。小活络缓释滴丸具有显著的缓释效果,基本符合一级和Weibull模型,初步研究表明其释药机制符合一级模型,表示其释放速率常数与扩散系数为正比,且随着时间的变化而变化。重构前的小活络(水)丸、小活络(大蜜)丸、小活络(浓缩)丸中总乌头类生物碱含量分别为:0.0266%、0.0447%、0.0506%,小活络缓释滴丸中总乌头类生物碱含量为0.0669%。结论 本文建立的紫外分光光度法测定小活络丸物质组释放度的方法灵敏准确;建立的HPLC测定小活络丸溶出液中苯甲酰新乌头原碱释药量的方法准确、稳定、可行;建立的HPLC同时测定小活络复方药材中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和次乌头碱含量的方法准确、稳定、可行,能满足本研究各项分析测试的要求。结果表明市售小活络(大蜜)丸具有一定的缓释特征,但不同厂家之间与同一厂家的不同个体之间释放度差异较大。自制的5种类型小活络丸与方程拟合的相关系数较低,释放速率较快,难以达到12h内缓慢平稳释药的效果。优化的小活络方提取工艺稳定、可行,制备的小活络(浓缩)丸中总乌头类生物碱含量较传统丸剂高,但释放速率仍较快,可能有突释的风险。制备的小活络缓释滴丸缓释效果较好,在12h内能够平稳、缓慢的释药。释放特征符合一级模型和Weibull模型,缓释效果较好。小活络缓释滴丸一天的给药剂量由大蜜丸的6g/天,减少至约2.4g滴丸/天,给药剂量有所减少,服用方便,可提高患者顺应性,同时更加安全、有效。