烟曲霉是一种重要的致病菌,能够引起免疫缺陷病人获得侵袭性曲霉感染。近年来,随着免疫抑制剂的大量使用,使得免疫缺陷病人越来越多,导致侵袭性曲霉感染的病例不断增加。目前,根据药靶的不同,主要有三类药物用于临床上治疗烟曲霉侵袭性感染,分别是唑类药物、多烯类药物和棘白菌素类药物。其中,唑类药物是临床指南推荐的一线治疗药物。但是,随着唑类药物在临床和农业上的大量使用,烟曲霉耐唑类药物菌株不断出现,对人类的生命健康造成了极大的威胁。已经报道的几种耐药分子机制为(1)药靶的改变或者高调;(2)药物外排泵的高调;(3)细胞内压力响应途径的改变。然而目前关于烟曲霉耐药机制的研究较为肤浅,尤其是对非药靶突变的耐药菌株的耐药机制了解甚少。鉴于此,本研究以烟曲霉为实验材料,通过药物压力筛选耐药菌株,对其进行基因组重测序分析,然后利用反向遗传学方法,分析出参与烟曲霉耐药的基因,加深烟曲霉对唑类药物耐药机制的认识。实验室之前的研究表明,AlgA可能是一个钙信号通路成员,它的缺失会导致烟曲霉耐唑类药物菌株出现的频率增加。本文以algA基因缺失菌作为出发菌株,在高浓度药物的环境下,筛选烟曲霉耐伊曲康唑菌株。以往研究报道表明,耐唑类药物的烟曲霉主要是由于其cyp51A基因的突变,然而在本文得到的105株烟曲霉耐药株中,仅有一株耐药株的cyp51A发生了点突变。通过基因组重测序分析以及反向遗传学的方法,首次发现Cox10的第243位氨基酸发生突变(R243Q)会导致烟曲霉产生对伊曲康唑的耐受性,同时也证明了 Cyp51A的第219位氨基酸发生突变(F219L)也可以使烟曲霉对伊曲康唑耐受。Cox1OR243Q突变菌株的耐药机制探究的相关实验表明,胞内药物滞留量的降低是其对伊曲康挫超级耐受的主要原因。综上所述,本研究表明,在烟曲霉中,还有很多非cyp51A突变可以使其产生对唑类药物的耐受性,algA基因的缺失,会导致非cyp51A突变的耐唑类菌株出现的频率增加;Cox10的点突变(R243Q)和Cyp51A的点突变(F219L)分别可以使烟曲霉对伊曲康唑耐受。此外,本研究认为,利用基因组重测序技术和序列比对分析,找出样本之间的差异位点(SNP),是目前研究耐药性的一种很有效的方法。