食管鳞状细胞癌microRNA表达谱研究

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目的:食管癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,在我国发病率及死亡率均较高,较差的预后与其浸润和转移密切相关。本研究应用microRNA表达谱芯片技术,选取10例有详细临床病理及随访资料的食管鳞状细胞癌组织及相应正常食管粘膜组织,检测并分析食管鳞状细胞癌患者有淋巴结转移组和无转移组以及五年内死亡组和存活组差异性表达的microRNA,为进一步理解食管鳞状细胞癌的发生、发展的分子机制,寻找并鉴定相应的诊断及预后分子标志物奠定理论基础。方法:10例食管鳞状细胞癌及其相应正常食管粘膜为新鲜冻存-80℃保存的的组织。Trizol法提取总RNA,用于芯片杂交前经紫外吸收测定法和变性琼脂糖凝胶电泳检测提取RNA的浓度、纯度及质量。用microRNA标记试剂盒miRCURYTM Array Power Labeling kit标记样本RNA,与miRCURY LNATM microRNA芯片(包括人类、大鼠、小鼠及相应病毒的microRNA共1891种和目前miRBase未包括在内的人类miRPlusTM探针385种)杂交并洗涤后,用Axon GenePix4000B芯片扫描仪进行扫描。以GenePix pro V6.0进行原始数据分析,MEV software(v4.6,TIGR)进行差异表达筛选(以P值<0.05和Fold Change值≥2或≤0.5为条件)及聚类分析。结果:10例食管鳞状细胞癌中共有448个microRNA呈阳性表达。食管鳞状细胞癌和正常食管粘膜组织中差异表达的microRNA共有10个,其中8个在食管鳞状细胞癌中出现表达上调,2个出现表达下调;有淋巴结转移组与无淋巴结转移组相比较,差异表达的microRNA共40个,其中表达上调的microRNA有22个,表达下调的microRNA有18个;五年内死亡组与存活组相比较,差异表达的microRNA共有7个,其中表达上调的microRNA有4个,表达下调的microRNA有3个。结论:microRNA表达谱芯片技术是一种有效的高通量分析食管鳞状细胞癌相关microRNA表达谱的检测方法。通过microRNA芯片发现的这些差异性表达的microRNA,有可能成为新的食管鳞状细胞癌特征性分子生物学标志物,并为进一步认识和研究microRNA在食管鳞状细胞癌发生发展中的作用,寻找并鉴定与临床诊治相关的分子标志物奠定了基础。
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