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为研究组织蛋白酶Z基因(Cathepsin Z gene, CTSZ)的表达规律,本研究以长白猪为研究对象,克隆CTSZ基因cDNA序列,对其进行了生物信息学分析,研究CTSZ基因在猪不同组织中的差异性表达,以及该基因在猪不同时期耳组织中的表达规律。构建猪CTSZ基因真核表达载体,同时采用组织块贴壁法培养猪成纤维细胞,并将融合表达载体转染猪成纤维细胞,检测该基因的表达量。 本研究主要内容包括:⑴成功克隆了CTSZ基因CDS序列,并将其与牛、羊、人、猴等进行同源性比较,结果均在81%以上,保守性较高。该序列共编码304个氨基酸,蛋白质属于亲水性球状蛋白,在第1~24位氨基酸处存在信号肽,由内向外存在两个强跨膜区,二级结构中包括9个α-螺旋、8个β-折叠和26个β-转角。⑵猪CTSZ基因在猪心、肝、脾、肺、肾、垂体、卵巢、背最长肌和腿肌共9个组织中均有表达,且mRNA表达具有差异性,其中腿肌和背最长肌中的表达量最高,肺、脾和肝中的表达量次之,心、垂体、卵巢和肾中的表达量最低。在耳组织中,CTSZ基因分别在猪初生和5月龄时出现表达高峰。⑶成功获得去除终止子的CTSZ基因编码序列。将其连接到pEGFP-N1质粒,获得pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体。⑷成功分离出猪成纤维细胞,pEGFP-N1-CTSZ融合表达载体成功转染猪成纤维细胞,得到绿色荧光蛋白表达,Q-PCR检测得出转染pEGFP-N1-CTSZ组CTSZ mRNA表达量是转染pEGFP-N1组的17.08倍。