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果蔬采后病害是影响其保鲜和贮藏的主要因素之一,目前使用化学类制剂减少病害仍是主要措施,但剂量不适宜造成残留污染；连续使用易诱发病原菌的抗药性；造成环境污染；危害人们的健康等。而健康的植物体内存在大量的内生菌,作为生防菌将是一个新的资源库,在寻找新的控制果蔬采后病害方面,具有良好的应用前景。本课题以健康辣椒为研究对象,从中筛选出对辣椒多种病原菌具有拮抗作用的内生菌,并从形态学特征、生理生化反应、分子生物学方面进行了生物学鉴定,对抑菌效果好的菌株进行了培养条件优化、抗菌活性物质分离、纯化与鉴定。主要结论如下：1研究了辣椒植株不同部位和品种内生菌的分布多样性。从辣椒植株根、茎、叶和果肉中共分离出27株内生细菌,7株内生真菌,从柿子椒、尖椒(绿色)、朝天椒(红色)、线椒不同品种共分离12株内生细菌,3株内生真菌,从果肉中分离到4株具有明显拮抗作用的内生细菌；其中一株试验号为strain-L抑菌效果最好,对链格孢菌、辣椒炭疽病菌、辣椒疫霉菌抑菌直径分别为27.71mm、24.8mm、19.45mm。另一株strain-39对链格孢菌、辣椒疫霉菌及细菌性软腐菌抑制直径分别为10.45mm、6.9mm、17.82mm。2strain-L和strain-39菌株鉴定。对strain-L和strain-39内生菌株进行分子生物学鉴定。strain-L序列与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的序列相似性达到99%,可确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens), strain-L的16SrDNA长度1452bp; strain-39的18SrRNA序列与粘质酵母菌序列相同,可确定为黏质红酵母(Rhodotorula mucilaginosa), strain-39的18rRNA长度为539bp。3strain-39抗菌特性初步研究对strain-39发酵滤液有机溶剂萃取液和乙醇沉淀提取液抑菌效果进行了研究,结果表明：75%乙醇沉淀物和乙酸乙酯提取物对茄科链格孢菌产孢、萌发和菌丝的生长等方面都具有较好抑菌效果,75%乙醇沉淀物EC5o为16.3531mg.L-1,乙酸乙酯提取物EC50为11.8003mg.L-1,将其应用于食品(辣椒、番茄)防腐上也有一定的效果,乙酸乙酯浓度为100mg/mL时,辣椒腐烂率下降了51.87%,番茄腐烂率下降了58.47%,75%乙醇沉淀物为100mg/mL时,辣椒腐烂率下降了47.50%,番茄腐烂率下降了50.47%。strain-39菌液75%乙醇沉淀物和乙酸乙酯提取物经过不同酸碱和温度处理后,抑菌效果存在差异,紫外诱变处理后对链格孢菌抑菌效果基本没有影响。由此分析,strain-39抑菌活性是多种成分共同作用结果。4strain-L生物学特性研究。将该菌在不同条件下培养,结果显示菌株在pH5.2-8.0范围内能较好的生长,最适生长pH为7.2;生长温度范围为25℃-30℃,最适生长温度为28℃,菌株同时具有较强的渗透压适应能力,能够利用大多数的碳源和有机氮源,以及少数的无机氮源,说明菌株的适应性较强。5strain-L发酵液对辣椒采后保鲜效果研究。利用从柿子椒果肉里筛选出的strain-L发酵滤液对不同辣椒品种(海青椒、红尖椒)贮藏效果进行初步研究。体内体外试验结果表明不同浓度strain-L发酵液对链格孢菌具有较好的抑菌效果。损伤接种25℃下贮藏7d,strain-L发酵液对海青椒和红尖椒都具有明显的防腐效果,与无菌水相比,海青椒腐烂率下降了51.87%,红尖椒下降了58.54%。非损伤接种9℃下贮藏24d, strain-L发酵液对不同辣椒品种保鲜效果存在差异,在整个贮藏期间,strain-L发酵液处理可降低辣椒采后腐烂率,明显优于无菌水组。贮藏24d后,青椒发酵液处理和保鲜液处理的腐烂率分别为37.5%,32.50%,与无菌水组相比,分别降低了35%和40%。红尖椒的发酵液处理和保鲜液处理的腐烂率分别为29.63%,24.14%,与无菌水组相比降低了34.19%,28.70%,不同品种间,发酵液处理组和保鲜液处理组的腐烂程度不同,且在整个贮藏期间,strain-L发酵液延缓了果实内还原糖含量、可溶性固形物、可溶性蛋白、Vc的降低,保持了辣椒较稳定的色泽和质构。Strain-L发酵液在保持辣椒商品价值、感官品质以及营养价值方面获得了较好的贮藏效果。6strain-L的发酵培养条件优化。利用均匀设训(Uniform Design, UD)与支持向量回归(Support Vector Regression, SVR)结合的方法(UD-SVR),得到最优的培养基配方：淀粉0.5%、葡萄糖2%、酵母提取物0.4%、CaCL21.3%、KH2PO40.1%,最优培养条件：温度30℃、时间36h、接种量1%和pH值7.0。在此条件下得到的发酵液稀释10倍抑菌活性达到57.39%,比基准试验高出20.53%。7strain-L菌株抑菌活性组分提纯与分离。strain-L1菌株发酵液经正丁醇萃取、硅胶柱层析、制备液相色谱分离,共分离出4种具有较强抑菌活性组分,分别为5、16、17、18号峰,对链格孢菌孢子萌发抑制率分别为：20.73%、27.43%、13.76%、28.5%,分析型RP-HPLC纯度分析结果表明：4种组分为相对单一峰,采用6530型-四级杆飞行质谱-高效液相联用仪(UHPLC-Q-TOF)对5,16,17,18四个组分进行结构鉴定,分子量分别为253Da、366Da、1131Da、384.2Da,解析出可能分子式为C10H23NO6、C24H30O3/C17H30N6OS、C55H87O24、C24H32O4。对抑菌活性最强的组分17进行深入研究,结合质谱、红外、1H-NMR、13C-NMR,确定为21β-巴豆酰基-22α-乙酰基原七叶皂苷配基-3β-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1-2)][β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)]-β-D-吡喃葡萄糖醛酸。