为探讨PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)后TLR3/NF-κB信号通路的作用机制,从云南省某猪场购买PRRS阴性的6周龄健康仔猪,用灌洗法获得PAMs,给予氧化剂和抗氧化剂进行预处理,PRRSV感染后,于6h、12h、24h、48h和72h不同时间点收集细胞为实验组,以未感染PRRSV的PAMs为对照组。观察实验组与对照组各时间点的CPE;应用Real-time PCR法对不同组别PRRSV、TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB mRNA水平进行动态分析;应用Western Blotting分析不同组别TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB蛋白表达的动态变化。结果显示,1)随时间的延长及病毒的增殖,细胞中CPE有明显的变化,抗氧化剂NAC处理接毒组,与正常接毒组细胞形态相比,细胞变形、聚集数量及范围明显减少,而与对照组相比,只有少量细胞变形、聚集;氧化剂 H2O2、OxPLs处理接毒组,与正常接毒组细胞形态相比,细胞变形、聚集数量及范围增多,而与对照组相比细胞形态不规则,变形严重,聚集成团块;2)Real-time PCR结果显示,实验组PRRSV、TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB mRNA与对照组相比随时间明显上调(P<0.05),到48h达到最大值,抗氧化剂 NAC处理接毒组,其虽有明显上调,但比正常接毒组同时间点有所下调,氧化剂 H2O2、OxPLs处理接毒组,mRNA表达比正常接毒组相同时间点的表达量有所升高;3)Western Blotting结果显示,在PRRSV感染不同时间点明显上调TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB蛋白水平表达(P<0.05),而且其表达量与感染之间有时间依赖性关系;在抗氧化剂 NAC干预后,进行PRRSV感染,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表达虽有上调,但表达量都比正常接毒组同时间点明显下降;在氧化剂 H2O2、OxPLs干预后,进行PRRSV感染,TLR3、TRIF、TRAF6及NF-κB的蛋白表达比正常接毒组相同时间点的表达量明显升高(P<0.05)。以上结果表明TLR3/NF-κB信号通路中各因子mRNA转录水平与蛋白水平表达量趋势基本一致,PRRSV感染可启动TLR3-NF-κB信号通路,随着时间的延长,PRRSV mRNA转录水平与TLR3、NF-κB转录水平呈正相关;抗氧化剂和促氧化剂可引起PAMs氧化应激状态的改变,TLR3/NF-κB信号传导通路是其调节的分子机制之一。