钙调蛋白磷酸酶(Calcineurin，CN)由CNA催化亚基和CNB调节亚基组成，是目前已知的唯一受Ca2+/CAM(Calmodulin)调节的蛋白磷酸酶。CN在许多种组织器官都有分布，参与许多重要的生命活动，包括免疫系统中一些免疫应答基因的转录调控过程。因此人们常以CN为靶酶筛选免疫抑制剂，其中CsA和FK506已经被广泛用于抑制器官移植手术引起的免疫排斥反应。本实验室前期以CN为靶酶从天然产物中筛选得到了免疫抑制剂单体GCC，经研究证明它是一种高效低毒的免疫抑制剂。本论文主要围绕GCC抑制CN活性的机理展开研究。　　 我们首先检测了GCC对CN活性的抑制作用，以及与CN活性十分相关的CNB和CaM对这种抑制作用的影响。为了初步确定GCC作用于CN上哪个部位，我们表达纯化了CNA系列剪切体CNAabc，CNAab和CNAa，并依次检测了GCC对它们的抑制作用。结果显示GCC对仅含有催化区的CNAa依然具有抑制作用，但明显弱于CNA及其它剪切体。由此我们初步推断GCC的作用部位在CNA的催化区，且受到BBH，CBD和AI区的影响。　　 GCC是如何作用于CNA的呢?它们之间是否有结合?我们分别采用了经典荧光光谱法和改进荧光光谱法进行研究，结果均显示GCC能以1：1的比例较强的与CNA结合，且二者结合受到CNB的影响。计算GCC与CNA结合前后热力学参数的变化情况，表明二者是通过疏水相互作用力结合的。接着分析了CNA系列剪切体在GCC作用下的荧光光谱，结果显示GCC与仅含有催化区的CNAa依然能够结合，但结合能力弱于CNA及其他剪切体。这表明GCC主要结合在CNA的催化区，且受到BBH、CBD和AI区的影响，这与酶活力测定得到的结论是一致的。　　 我们表达纯化了只含一个Trp的CNA突变体(W134、W232、W342和W352)，用它们进行非辐射能量转移实验，得到了GCC与每个Trp之间的距离，并用距离在CNA的晶体结构上作出药物可能的结合位点。Docking对接实验也模拟得到了药物可能的结合位点。将两种方法得到的结果进行比对，我们最终确定了GCC在CNA上的结合位点。　　 GCC与CNA的结合是否会引起CNA二级结构的改变呢?我们通过圆二色谱法进行了分析，结果表明CNA与GCC结合后α-螺旋的含量增加，二级结构变得更加紧密。　　 初步清楚GCC的分子作用机理后，我们探究了药物对Jurkat细胞内CN活性的抑制作用。结果表明药物对活细胞内的CN活性仍然具有抑制作用。这为研究GCC在体内发挥免疫抑制作用的机理奠定了基础。