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目的:观察复方“通络方”对ALF模型大鼠大鼠生化、生存时间、病理、TLR4、NF-κ B、HMGBI、Caspase-3等指标的变化情况,探讨ALF肝损伤的病机及作用机理。 方法:采用随机对照的方法,以健康的SD大鼠为研究对象,大鼠随机分4组:空白(B)组、模型(M)组、美能(P)组、通络方组(TLP),大鼠腹腔注射D-GalN复制急性肝衰竭模型,美能组给予同体积的美能混悬液(15.6mg/kg/d),通络方组给予中药混悬液液(29.77/kg/d)每天1次。观察造模后96h的存活数量及生存时间,采用全自动生化分析法测定大鼠血清ALT、AST、TBil、ALB及CHE水平。采用全自动分析法测定大鼠血浆PT水平。采用PCR法检测肝组织中TLR4 mRNA、NF-κBmRNA、HMGBl mRNA、Caspase-3 mRNA的表达情况。 结果 1、生存率造模后96h,模型组死亡10例,死亡率为66.7%,美能组死亡8例,死亡率为53.3%,通络方组死亡7例,死亡率46.7%,差异无统计学意义(P>0.05)。模型组、美能组、通络方组平均生存时间次为63.5、71.8、83.8h;通络方组累积生存率高于模型组(P<0.05),但是美能组与模型组、通络方组差异均无统计学意义(P>0.05)。 2.血清中ALT、AST水平变化情况 对比空白组,模型组、美能组、通络方组大鼠的血清中的ALT、AST水平是明显升高的,与模型组比较,美能组、通络方组大鼠的血清中的ALT、AST显著降低,与美能组比较,通络方组大鼠的血清中的ALT、AST显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。 3、血清中TBiL水平变化情况 对比空白组,模型组、美能组、通络方组大鼠的血清中的TBiL明显升高,与模型组比较,美能组、通络方组大鼠的血清中的TBIL显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。但通络方组与美能组鼠的血清中的TBIL比较差异无统计学意义(P>0.05)。 4、血清中ALB、CHE、PT水平变化情况 对比空白组,模型组、美能组及通络方组血清ALB、CHE明显降低,而PT明显延长,差异有统计学意义(P<0.05),与模型组比较,通络方组的ALB、CHE、PT明显改善,差异有统计学意义(P>0.05)。 5、大鼠肝组织TLR4 mRNA表达的相对含量与空白组比较,模型组大鼠肝组织中的TLR4 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠比较,美能组及通络方组TLR4mRNA表达量显著减少,且通络方组下降的幅度较大,差异均有统计学意义(P<0.05)。 6、大鼠肝组织 NF-κB mRNA表达的相对含量模型组大鼠肝组织中的NF-κB mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠比较,美能组及通络方组NF-κ B mRNA表达量显著减少,且通络方组下降的幅度更大,差异均有统计学意义(P<0.05)。 7、大鼠肝组织 HMGB1 mRNA表达的相对含量与空白组大鼠比较,模型组大鼠肝组织中的HMGBl mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠比较,美能组及通络方组HMGB1 mRNA表达量显著减少,且通络方组下降的幅度更大,差异均有统计学意义(P<0.05)。 8、大鼠肝组织 casepase-3 mRNA表达的相对含量与空白组大鼠比较,模型组大鼠肝组织中的casepase-3 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组大鼠比较,美能组及通络方组Casepase-3 mRNA表达量显著减少,且通络方组下降的幅度更大,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论通络方能够显著增加急性肝衰竭大鼠的生存时间及生存率,改善大鼠的肝功能,促进凝血功能的修复,促进肝脏细胞的再生。另外一方面通过基因实验表明,通络方能够通过下调肝组织TLR4表达,降低肝组织HMGBI表达水平,阻断TLR4/NF-κ B信号通路,减少前炎症性细胞因子的表达,下调Caspase-3mRNA,可抑制肝细胞的凋亡,促进肝细胞的再生。